當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>核酸電泳及回收>> 三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗
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更新時間:2017-07-14 12:30:39瀏覽次數(shù):143次
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預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗詳細(xì)介紹:
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
CL-03142V6.11(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HA Others H7N7 甲型流感 H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-c tRNA
J82細(xì)胞,膀胱癌細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞,WI-38細(xì)胞 原代系膜細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml
豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4
WISP1 Others Human 人 WISP1 / CCN4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
4. 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204
CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
4T1 小鼠癌細(xì)胞
ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204
4. 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)
CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
4T1 小鼠癌細(xì)胞
ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
INH-A ELISA Kit 大鼠抑制素AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Beta-Amyloid 1-40(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記β淀粉樣肽(1-40)C端抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FOXO1A 叉頭蛋白O1抗體 規(guī)格 0.2ml
CR(Mouse Calretinin) ELISA Kit 小鼠鈣結(jié)合蛋白 96T
NR1D1 英文名稱: 細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體 0.2ml
ADAMTS9 英文名稱: 整合素樣金屬蛋白酶與*9型抗體 0.1ml
Beta-Amyloid 1-40(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記β淀粉樣肽(1-40)C端抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.5ml
FSH beta 英文名稱: 促卵泡刺激素抗體 0.1ml
*乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體 Anti-ChAT 0.1ml
Anti-ORX-A/FITC 熒光素標(biāo)記增食欲素-A/欲激素AIgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKA/PKAcat/PKACB 蛋白激酶A抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Guinea IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豚鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB) 1.5mL實驗TNF- Alpha 大鼠壞死因子-αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DR3/APO3 死亡受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NCE2 泛素結(jié)合酶E2F抗體 規(guī)格 0.2ml
Human coagulation factor X ,F X ELISA Kit 人*Ⅹ 96T
SPRN 英文名稱: 新朊蛋白抗體(C端) 0.2ml
CD27 英文名稱: CD27抗體 0.2ml
Anti-DR3/APO3 死亡受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
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