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更新時間:2017-07-14 12:29:52瀏覽次數(shù):123次
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預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×( 非甘油 )10mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×( 非甘油 )10mL保存詳細(xì)介紹:
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×( 非甘油 )10mL保存使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×( 非甘油 )10mL保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
人腸平滑肌細(xì)胞HISMC
HA Others H7N8 甲型流感 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
豬腎細(xì)胞;PK(15)
大鼠肺細(xì)胞;WTRL1 胃腺癌細(xì)胞,SGC-7901細(xì)胞 GR細(xì)胞,鼠成纖維細(xì)胞系
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞 Mouse
PCSK1 Others Human 人 PCSK1 / NEC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠中腦縫神經(jīng)細(xì)胞(腦脊)(MN-r)(1×106)
人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg
兔腎細(xì)胞;RK13
BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1 小鼠成骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) Rattus
EFNA3 Others Mouse 小鼠 EFNA3 / Ephrin-A3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg
小鼠中腦縫神經(jīng)細(xì)胞(腦脊)(MN-r)(1×106)
兔腎細(xì)胞;RK13
BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1 小鼠成骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) Rattus
EFNA3 Others Mouse 小鼠 EFNA3 / Ephrin-A3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-SSTR5/FITC 熒光素標(biāo)記*受體5(SSTR5)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
beta-Amyloid(1-16) peptide (rat, mouse) β淀粉樣肽(1-16)(大鼠,小鼠)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 Anti-PEPT1 0.1ml
SLC25A13 英文名稱: 線粒體內(nèi)鈣結(jié)合天冬酸/谷酸載體蛋白抗體 0.2ml
EPH receptor A4 英文名稱: 酪酸蛋白激酶A4抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MYPT1(Thr696) 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體 規(guī)格 0.1ml
beta-Amyloid(1-16) peptide (rat, mouse) β淀粉樣肽(1-16)(大鼠,小鼠)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
F1 operon positive regulatory protein(NT) 英文名稱: 肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體(N端) 0.2ml
毒蕈堿型乙酰*受體M3抗體 Anti-ChRM3 0.1ml
Anti-Os05g/0477200 protein /FITC 熒光素標(biāo)記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKA R2/PKA IIα 蛋白激酶A受體2α亞基抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-goat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗羊IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×( 非甘油 )10mL保存IL-15 大鼠白介素-15Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Defensin alpha 4 防御素α4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Nectin 2/CD112 細(xì)胞粘附分子CD112抗體 規(guī)格 0.1ml
human Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit *E 96T
SPTBN2 英文名稱: 非紅細(xì)胞血影腦蛋白β2/spectrin β III抗體 0.2ml
CRIPTO 英文名稱: 畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端) 0.1ml
Anti-Defensin alpha 4 防御素α4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
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