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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>核酸電泳及回收>> DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)
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更新時(shí)間:2017-07-14 12:28:26瀏覽次數(shù):119次
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預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
PAGE 膠長(zhǎng)加樣槍頭1盒實(shí)驗(yàn)
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi),直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi),用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹:
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開(kāi)即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱(chēng)取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱(chēng)取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
CM-R045大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC
NCI-H226[H226]細(xì)胞,人肺癌細(xì)胞 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞,T24細(xì)胞 人絨毛膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HVCEC
鼬肺上皮細(xì)胞;MV-1-Lu
MMP1 Others Human 人 MMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
小鼠神經(jīng)黑質(zhì)細(xì)胞(MN-sn)(1×106)
人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg
兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1 小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 Rattus
ACVR2A Others Human 人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg
小鼠神經(jīng)黑質(zhì)細(xì)胞(MN-sn)(1×106)
兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1 小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 Rattus
ACVR2A Others Human 人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
血藍(lán)蛋白抗體 Anti-KLH 0.1ml
SSX5 英文名稱(chēng): 滑膜肉瘤X斷點(diǎn)蛋白5抗體 0.2ml
FAPA 英文名稱(chēng): 成纖維細(xì)胞激活蛋白α抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PLK1(Thr210) 磷酸化絲/*蛋白激酶Plk1抗體 規(guī)格 0.1ml
Beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
Phospho-c-Fos (Thr325) 英文名稱(chēng): 磷酸化c-fos抗體 0.1ml
原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體 Anti-C-jun/AP-1 0.1ml
Anti-OVA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKA C alpha+beta 蛋白激酶C抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)小鼠抗人IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×10mL實(shí)驗(yàn)VEGFR-2/sFLK-1(Human soluble vascular endothelial growth factor receptor-2) ELISA Kit 人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/FITC FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.3ml
MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生亮酸拉鏈額外核因子 96T
SRC 英文名稱(chēng): src原癌基因抗體 0.2ml
CRMP3 英文名稱(chēng): 二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白3抗體 0.2ml
Anti-GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
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