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TAE 電泳液 ,50×2500mL*

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更新時(shí)間:2017-07-14 12:16:26瀏覽次數(shù):138次

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TAE 電泳液 ,50×2500mL*使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

TAE 電泳液 ,50×2500mL*產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
TAE 電泳液 ,50×2500mL*詳細(xì)介紹:

TAE 電泳液 ,50×2500mL*使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
TAE 電泳液 ,50×2500mL*后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-h

猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4 人巨核細(xì)胞白血病,CHRF細(xì)胞 SK-N-MC(神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928

GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人成纖維細(xì)胞(HMF)(5×105)

人骨肉瘤細(xì)胞;HOS

CM-H112人脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 Rattus

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人骨肉瘤細(xì)胞;HOS

人成纖維細(xì)胞(HMF)(5×105)

CM-H112人脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 Rattus

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-FAS(Apo-a1/CD95)/Biotin *標(biāo)記兔抗人、大鼠、小鼠載脂蛋白A1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Bid (BH3 interacting domain death agonist) BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

甲狀腺素T4抗體 Anti-Thyroxine/Tg4-Ab 0.2ml

SART1 英文名稱: T淋巴細(xì)胞識別的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體 0.2ml

EAAT2 英文名稱: 膠質(zhì)細(xì)胞谷酸運(yùn)載蛋白2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-KMT6/EZH2(Thr487) 磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體 規(guī)格 0.1ml

Bid (BH3 interacting domain death agonist) BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Rabbit Anti-mouse IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.3ml

FLT-3 英文名稱: FMS樣酪酸激酶3 0.2ml

細(xì)胞角蛋白5抗體 Anti-CK5 0.1ml

Anti-P14ARF/FITC 熒光素標(biāo)記抑癌基因p14抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PITX2 成對樣同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子2抗體 規(guī)格 0.2ml

Donkey Anti-human IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記驢抗人IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
TAE 電泳液 ,50×2500mL*Substance P 大鼠P物質(zhì)Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-VEGFR3 表皮生長因子受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh MYL3/Myosin light chain 3 肌球蛋白輕鏈3抗體 規(guī)格 0.2ml

HLA-G(Human leukocyte antigen G) ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原G 96T

ST18 英文名稱: 抑制蛋白18抗體 0.2ml

CHAC1 英文名稱: 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控樣蛋白1抗體 0.2ml

Anti-VEGFR3 表皮生長因子受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

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