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更新時(shí)間:2017-07-11 13:38:28瀏覽次數(shù):133次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)微量單鏈 DNA 定量試劑盒1mL說(shuō)明書(shū)
隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次說(shuō)明書(shū)使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無(wú)水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過(guò)第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?8 步之后進(jìn)行。
隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次說(shuō)明書(shū)詳細(xì)說(shuō)明書(shū):
確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針?lè)肿拥奈稽c(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒(méi)入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長(zhǎng)到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過(guò)程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過(guò)程中,一定不要使印跡。
小鼠 IL18R1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): IL18R1
小鼠 DKK3 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): DKK3
小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): CLEC6A
小鼠 CD34 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): CD34
小鼠 CD5 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): CD5
小鼠 Axl Kinase ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Mouse 英文名稱(chēng): AXL
人 LAIR2 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): LAIR2
人 ICAM-2 / CD102 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): ICAM2
人 DLL1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): DLL1
人 DOPA Decarboxylase / DDC ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): DDC
人 Cystatin F / CST7 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): CST7
食蟹猴 CD200R ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Cynomolgus 英文名稱(chēng): CD200R1
人 COQ7 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): COQ7
人 Complement Component C2 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): C2
人 Contactin 5 / CNTN5 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): CNTN5
人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): AGT
人 ACRV1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): ACRV1
人 SULT1E1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): SULT1E1
大鼠 PCSK9 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Rat 英文名稱(chēng): PCSK9
人 EPOR ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類(lèi)型: Kit 種屬: Human 英文名稱(chēng): EPOR
早老素1(PS-1)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: PS-1 ELISA Kit
再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線(xiàn)蛋白(REG1A)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: REG1A ELISA Kit
再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒 * ,英文名: REG-4 ELISA Kit
載脂蛋白L1(APOL1)ELISA試劑盒 * ,英文名: APOL1 ELISA Kit
載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: Apo-H ELISA Kit
載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: Apo-E ELISA Kit
載脂蛋白C3(Apo-C3)ELISA試劑盒 * ,英文名: Apo-C3 ELISA Kit
載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑盒 * ,英文名: Apo C3 ELISA Kit
載脂蛋白C2(Apo-C2)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: Apo-C2 ELISA Kit
載脂蛋白C1(APO-C1)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: APO-C1 ELISA Kit
載脂蛋白B48(apo-B48)ELISA試劑盒 * ,英文名: apo-B48 ELISA Kit
載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 * ,英文名: apo-B100 ELISA Kit
載脂蛋白A5(apo-A5)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: apo-A5 ELISA Kit
載脂蛋白A4(Apo-A4)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: Apo-A4 ELISA Kit
載脂蛋白A2(apo-A2)ELISA試劑盒 * ,英文名: apo-A2 ELISA Kit
載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒 * ,英文名: apo-A1 ELISA Kit
載脂蛋白A1(apo A1)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: apo A1 ELISA Kit
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