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一站式 RNA 電泳套裝10 次保存

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一站式 RNA 電泳套裝10 次保存使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

一站式 RNA 電泳套裝10 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開(kāi)即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
一站式 RNA 電泳套裝10 次保存詳細(xì)介紹:

使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi),直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi),用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。

整合素α2(ITGA2)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: ITGA2 ELISA Kit
整合素A5(ITGA5)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: ITGA5 ELISA Kit
真胰島素(TI)ELISA試劑盒 * ,英文名: TI ELISA Kit
真核細(xì)胞延伸因子2(eEF2)ELISA試劑盒 * ,英文名: eEF2 ELISA Kit
真核起始因子4A-II(EIF4A2/DDX2B/EIF4F)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: EIF4A2/DDX2B/EIF4F ELISA Kit
真核翻譯起始因子3a(eIF3a)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: eIF3a ELISA Kit
著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA試劑盒 * ,英文名: CENP-B ELISA Kit
*甲狀腺刺激素(LATS)ELISA試劑盒 * ,英文名: LATS ELISA Kit
張力蛋白4(TNS4)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: TNS4 ELISA Kit
粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: MEC/CCL28 ELISA Kit
粘蛋白3(MUC3)ELISA試劑盒 * ,英文名: MUC3 ELISA Kit
粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒 * ,英文名: MUC2 ELISA Kit
粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: MUC7 ELISA Kit
粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: MUC5B ELISA Kit
粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 * ,英文名: MUC5AC ELISA Kit
增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)ELISA試劑盒 * ,英文名: APRIL ELISA Kit
早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1(EGR1)ELISA試劑盒 進(jìn)口分裝 ,英文名: EGR1 ELISA Kit
早期前列腺癌抗原2(EPCA2)ELISA試劑盒 進(jìn)口原裝 ,英文名: EPCA2 ELISA Kit
早期活化抗原CD69(CD69)ELISA試劑盒 * ,英文名: CD69 ELISA Kit

小鼠 IFNAR1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Mouse 英文名稱: IFNAR1
人 LMAN2 / VIP36 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: LMAN2
人 CALML5 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: CALML5
人 alpha-Galactosidase A / GLA ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: GLA
人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: FCN1
人 EGFR / HER1 / ErbB1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: EGFR
食蟹猴 CD16 / FCGR3 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Cynomolgus 英文名稱: FCGR3
人 Cystatin E / CST6 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: CST6
人 BID ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: BID
人 VNN2 / Vanin-2 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: VNN2
人 SULT1B1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: SULT1B1
人 STK4 / MST1 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Human 英文名稱: STK4
小鼠 S100A6 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Mouse 英文名稱: S100A6
小鼠 PCSK9 ELISA配對(duì)抗體 產(chǎn)品類型:  Kit 種屬: Mouse 英文名稱: PCSK9


 

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