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更新時間:2017-07-07 11:36:25瀏覽次數(shù):191次
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茜素紅S染色液(1%,pH4.2)100ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
茜素紅S染色液(1%,pH4.2)100ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CW-2(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B
SIRPG Others Cynomolgus 食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
769-P細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞系(769-P) 中國倉鼠倉鼠肺細(xì)胞,R1610細(xì)胞 CL-0406NCI-H838(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HUM, 正常人主動脈平滑肌細(xì)胞
hMNC-PB-c single donorultra-pure 外周血來源的人類單核細(xì)胞 人髓核細(xì)胞HNPC
CL-0160Molt-4(人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人主動脈平滑肌細(xì)胞裂解物HASMCL
SK-HEP-1細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,95-C細(xì)胞 腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1
TIMP1 Others Human 人 TIMP-1 / TIMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人結(jié)腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞HCoMEC
KMB 人胚肺成纖維樣細(xì)胞
CM-H091人大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤
人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細(xì)胞纖維連接蛋白(cFn)免疫試劑盒 Human cellular fibronectin,cFn ELISA kit
酶(CAT)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
Ratnitricoxidesynthase,NOSELISA試劑盒大鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒人組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMacrophageInflammatoryProtein-3β,MIP-3βELISAKit人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
The rat gastric cancer marker CA199ELISA Kit 大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒
HumanCystatinC,Cys-CELISAKit 人半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanComplement1inhibitorautoantibody,C1INHELISA試劑盒人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
茜素紅S染色液(1%,pH4.2)100ml使用說明書人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人淋巴毒素α(LTA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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