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更新時間:2017-07-07 11:34:51瀏覽次數(shù):322次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
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*水溶液(5%)100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
*水溶液(5%)100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
BGC-803(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET
CD300LG Others Human 人 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 人細胞裂解液 (陽性對照)
KC細胞,人腎癌細胞 小鼠腦神經(jīng)瘤細胞,Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞 CL-0373KiMA(人胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞
HWP-c subcutaneous 人類白前脂肪細胞(HWP)皮下 500,000cells 人淋巴成纖維細胞HLF
腦微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠黑色素瘤細胞;B16
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA 肝癌細胞,Hepa 1-6細胞 M145細胞,猴腎C細胞
人胚肺二倍體細胞;KMB-17
JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人角膜細胞裂解物HKL
綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞;MFC-GFP
HL-7702細胞,人肝細胞正常 人干細胞因子單克隆抗體細胞株,AMS2細胞 敘利亞倉鼠皮膚細胞;GH-S1
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml
大鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 ,英文名: AST ELISA Kit
人細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA檢測試劑盒HumanCyclin-D1ELISAKit 96T/48T
駱駝轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒 Camel transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA Kit
CLIAKitforPSGL-1/CD162ELISAKit小鼠抗PSGL-1/CD162ELISAKit規(guī)格:48T/96T
石蠟切片總*舒爾茨直接染色試劑盒50次
ELISAKitHVA人高香草酸規(guī)格:48T/96T
小鼠D-乳酸(D-LAC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat vitamin C (VC) ELISA Kit 大鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒
HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISAKit 人脫輕表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanColonCancerAntigen,CCAELISA試劑盒人結腸癌抗原(CCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織AMPK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanpyruvatekinase,PKELISAKit人丙同酸激酶(PK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*水溶液(5%)100ml實驗方法人肝素糖蛋白(HSPG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
行性乙腦IgM抗體(JEIgM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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