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更新時間:2017-07-07 11:31:31瀏覽次數(shù):411次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
硫堇染色液(0.4%)50ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
硫堇染色液(0.4%)50ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
A-427(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人急性早幼粒白血病細(xì)胞;HL-60
CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 (aa 176-687) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
293ET細(xì)胞,表達SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞,CV-1細(xì)胞 CL-0294MuM-2C(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HUtSMC-c 人類子宮平滑肌細(xì)胞(HUtSMC) 500,000cells 原代心肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml
CL-0286M1(小鼠白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Victoria/210/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞cDNAHVT cDNA
豬腎細(xì)胞;LLC-PK1 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞,NK-92細(xì)胞 P615細(xì)胞,615小鼠狀肺腺癌瘤株
Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/duck/Hunan/795/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
GPNMB Others Mouse 小鼠 GPNMB / Osteoactivin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓裂解物HMSC-bm L
人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
COS-6細(xì)胞,非洲綠猴腎細(xì)胞 A375(人類惡性黑色素瘤) 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1
EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)
BC-021(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP
小鼠胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA試劑盒 ,英文名: SOD3 ELISA Kit
人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA檢測試劑盒Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit 96T/48T
大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒 Rat Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA Kit
英文名稱RatACTHELISAKit大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)規(guī)格:96T/48T
頂體形態(tài)刀A凝集素?zé)晒鈽?biāo)記(ConA-FITC)染色試劑盒20次
ELISAKi-3人神經(jīng)營養(yǎng)因子3規(guī)格:48T/96T
小鼠NOD樣受體-1(NOD-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat hyaluronic acid binding protein (HABP) ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒
HumanThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 人促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCollagenTypeⅠ,ColⅠELISA試劑盒人Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶活性間接比色法定量檢測試劑盒20次
Humanrecombinationactivatinggene1,RAG-1ELISAKit人重組激活基因1(RAG-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硫堇染色液(0.4%)50ml使用說明書人膜攻擊復(fù)合物(MAC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人膜輔蛋白(MCP/CD46)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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