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地衣紅染色液(1%)50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
地衣紅染色液(1%)50ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
U-937(人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]
HEPACAM2 Others Rat 大鼠 HepaCAM2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Ketr-3細(xì)胞,人腎癌細(xì)胞 大鼠鼻咽癌細(xì)胞,FAT細(xì)胞 CL-0186PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 )5×106cells/瓶×2
結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HPlEpC-c 人類胎盤細(xì)胞上皮細(xì)胞 500,000cells 食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基SM-prf
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL
大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3 結(jié)腸腺癌細(xì)胞,CW-2細(xì)胞 R1610細(xì)胞,中國倉鼠倉鼠肺細(xì)胞
BPH-1, 人前列腺增生細(xì)胞 Human
ICOSLG Others Human 人 ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞;THP-1
CL-0453TE-10(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) NRRL 2543[LSHTM BB325]細(xì)胞 HFL-I(MEMα)(胚肺成纖維細(xì)胞)
人細(xì)胞;C-33A
BTC Others Mouse 小鼠 BTC / Betacellulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
*降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒 Human Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit
超氧化物歧化酶(SOD)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatMyosin,MYSELISA試劑盒大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHerpesGestation,HGELISA試劑盒人皰疹抗體(HG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLymeIgGELISAKit人萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat carbonic anhydrase 2 (CA-2) ELISA Kit 大鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA試劑盒
HumanNeonatalThyroxine,NN-T4ELISAKit 人新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanclusterin,CLUELISA試劑盒人凝聚素(CLU)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白脫乙酰化酶3(HDAC3)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanReverseTri-iodothyronine,rT3ELISAKit人反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人脾臟酪酸激酶(Syk)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人皮質(zhì)/上腺(CORT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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