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更新時間:2017-07-06 10:04:28瀏覽次數(shù):337次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
幽門螺旋桿菌染色液100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
幽門螺旋桿菌染色液100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
TE-1(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2
正常小鼠Leydig細胞;TM3
PROCR Others Cynomolgus 食蟹猴 Epcr / PROCR 人細胞裂解液 (陽性對照)
LTEP-sm細胞,人小細胞肺癌細胞 小鼠皮膚細胞,JB6-C41細胞 CL-0122HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2
氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HUtMEC-c 人子宮微血管內(nèi)皮細胞(HUtMEC) 500,000cells 臍靜脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人正常肝細胞;L-02
HA Others H5N2 甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
NCI-H292 人肺癌細胞(淋巴結轉(zhuǎn)移)
RBE, 人肝膽管癌細胞
HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細胞
人B淋巴母細胞;HMy2.CIR 人前列腺平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
LIF Others Mouse 小鼠 LIF 人細胞裂解液 (陽性對照)
人喉癌上皮細胞;Hep-2
EC9706 食管癌
SW620人結腸癌細胞 SW620 human colon cancer cells L-15+10%FBS
TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標簽)
人胚胎絨毛細胞(HAF)(1×106 ) 細胞名稱 種屬
大鼠血小板生成素(TPO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人酰基化饑餓素(AG)免疫試劑盒 Human acylated ghrelin,AG ELISA Kit
多酚氧化酶(PPO)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
Ratmyelinbasicprotein,MBPELISA試劑盒大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHepatitisDvirusIgM,HDVIgMELISA試劑盒人丁型肝炎IgM(HDVIgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISAKit人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒
Humanplacentalribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCiliaryNeurotrophicFactor,CNTFELISA試劑盒人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*(leucine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA,S100A8ELISAKit人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
幽門螺旋桿菌染色液100ml實驗方法人去甲上腺素(NA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人趨化因子(FK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人清道夫受體B(SRB/CD36)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人(HYD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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