血腦屏障完整性檢查試劑盒100ml使用說明書使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
血腦屏障完整性檢查試劑盒100ml使用說明書操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
血腦屏障完整性檢查試劑盒100ml使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
T84(人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞) 5×106cells/瓶×2

615小鼠網(wǎng)織細胞性白血病瘤株;L615

JTB Others Human 人 Jumping Translocation Breakpoint / JTB 人細胞裂解液 (陽性對照)

SK-LU-1細胞，人低分化肺腺癌細胞 大鼠腎成纖微細胞,NRK-49F細胞 CL-0106HFL1(人肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2

軟骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

HBMEC-c 人類腦部微血管內(nèi)皮細胞(HBMEC) 500,000cells 腦微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
CL-0272EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H6N4 甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠腮腺細胞*培養(yǎng)基 100mL

HUVEC[HUV-EC-C]人臍靜脈內(nèi)皮細胞 Human umbilical vein endothelial cells HUVEC[HUV-EC-C] DMEM+10%FBS

IL18BP Protein Mouse 重組小鼠 IL18BP 蛋白 (His 標簽)

PA-1(人卵巢腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 H9c2(2-1)(大鼠心肌細胞)
EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照)

人虹膜色素上皮細胞HIPEpiC

大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清

EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標簽)

293ET(人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞)) 5×106cells/瓶×2 原代心肌細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml
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