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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
伊文思藍染色液(0.5%)法)100ml實驗方法SW480(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8
KLRF1 Others Cynomolgus 食蟹猴 NKp80 / KLRF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HLAmP細(xì)胞,人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞 大鼠巨噬細(xì)胞,MC細(xì)胞 CL-0058CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HDBEC-c adult 人類皮膚血內(nèi)皮細(xì)胞(HDBEC)來自成年捐獻者 500,000cells 角膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
伊文思藍染色液(0.5%)法)100ml實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
伊文思藍染色液(0.5%)法)100ml實驗方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
伊文思藍染色液(0.5%)法)100ml實驗方法實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
CM-R031大鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1008
CD27 Others Mouse 小鼠 CD27 / TNFRSF7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CSF2 Others Mouse 小鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNAHA-h cDNA
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1
Hep3B2.1-7細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞,D341Med細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-24
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維 5×106cells/瓶×2
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Rat leptin (LEP) ELISA Kit 大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒
HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit 人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
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