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更新時間:2017-07-06 09:57:39瀏覽次數(shù):539次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
網(wǎng)織紅細胞染色液50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
網(wǎng)織紅細胞染色液50ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
ST(豬細胞) 5×106cells/瓶×2
大鼠肝細胞;BRL
STX8 Others Human 人 STX8 / Syntaxin 8 人細胞裂解液 (陽性對照)
PG-LH7細胞,人肺巨細胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系 小鼠胚成纖維包裝細胞,ψ2細胞 CL-0026ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細胞)5×106cells/瓶×2
胃粘膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HDMEC-c pre-screened 人真皮微血管內(nèi)皮細胞(HDMEC)預(yù)選型 500,000cells 肝實質(zhì)細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CM-R079大鼠冠狀動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠顆粒細胞MGC
猴腎細胞;vero IgRCD4- 慢性髓原白血病,K562細胞 BxPC-3(原位胰腺腺癌細胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923
CFH Others Human 人 CFH / Complement Factor H 人細胞裂解液 (陽性對照)
SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人冠狀動脈內(nèi)皮細胞HCAEC
非洲綠猴腎細胞;CV-1
大鼠骨髓瘤細胞;Y3-Ag 1.2.3 肺腺癌細胞,SPC-A-1細胞 B/c-ES細胞,BALB/c小鼠ES細胞
QGY-7701, 人肝癌細胞 Human
IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠型乙酰*受體(N-AChR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)免疫試劑盒 Human ABCA1 ELISA Kit
抗壞血酸過氧化物酶(APX)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISA試劑盒大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanhepatitisBvirusXinteractingprotein,HBXIPELISA試劑盒人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISAKit人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 人維生素D2(VD2)ELISA試劑盒
HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 人相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanchlamydialprotease-likeactivityfactor,CPAFELISA試劑盒人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
桌面DNA清除溶液500毫升
Humansecretorycomponent,SCELISAKit人分泌成分(SC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
網(wǎng)織紅細胞染色液50ml實驗方法人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)激肽A(NKA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)酸酶(NA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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