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更新時間:2017-07-06 09:57:19瀏覽次數(shù):121次
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Rakoff染色液100ml免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Rakoff染色液100ml免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
SPC-A-1(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
大鼠肺泡巨噬細胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]
MZB1 Others Human 人 MZB1 / PERP1 人細胞裂解液 (陽性對照)
PLC/PRF/5細胞,人肺癌亞歷山大細胞系 小鼠胚成纖維包裝細胞,PA317細胞 CL-0018A9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞)5×106cells/瓶×2
小梁網(wǎng)細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HDMEC-c adult 人真皮微血管內(nèi)皮細胞(HDMEC)來自成年捐獻者 500,000cells 肝竇內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人胚肺成纖維細胞;CCC-HPF-1
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0280HEL(人紅白細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2
L1細胞,卵巢癌細胞 急性T細胞白血病細胞),Jurkat細胞 人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1
6T-CEM (人T細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2
ANPEP Others Mouse 小鼠 ANPEP / APN / CD13 人細胞裂解液 (陽性對照)
IL12B Others Marmoset 狨猴 IL12B / IL-12B 人細胞裂解液 (陽性對照)
人骨髓間充質(zhì)干細胞HMSC-bm
非洲綠猴腎細胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-
NCI-H1650細胞,人肺支氣管癌細胞 小鼠前列腺癌細胞,RM-1細胞 CM-R031大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-28050 DC Generation Medium, 樹突狀細胞生成培養(yǎng)基(即用型) 250ml
大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2(ABCG2)免疫試劑盒 Human ABCG2 ELISA Kit
抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
Ratmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISA試劑盒大鼠單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanhepatitisBvirusXAg,HBxAgELISA試劑盒人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlowmolecularweightheparin,LMWHELISAKit人低分子肝素(LMWH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat eosinophil chemotactic protein Eotaxin 1 (Eotaxin 1/CCL11) ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒
HumanEndometriumAntibody,EMAbELISAKit 人抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanChlamydiatrachomatis,CISA試劑盒人沙眼衣原體抗體(CT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米TC1507品系基因檢測試劑盒20次
HumansecretoryimmunoglobulinA,SIgAELISAKit人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Rakoff染色液100ml免費代測人神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)生長導向因子Slit2ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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