甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
SK-OV-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]

EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

MRC-5細(xì)胞，人胚肺細(xì)胞 大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞,RLE-6TN細(xì)胞 T-109B彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

HUVEC-c Growth Medium 2 pooled 500,000cells 肺大靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-h

猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4 人巨核細(xì)胞白血病，CHRF細(xì)胞 SK-N-MC(神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928

GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人成纖維細(xì)胞(HMF)(5×105)

人骨肉瘤細(xì)胞;HOS

CM-H112人脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 Rattus

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶19(MMP19)ELISA試劑盒 ，英文名： MMP19 ELISA Kit

人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanadenosinedeaminase,ADAELISAKit 96T/48T

大鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒 Rat Fibronectin,FN ELISA Kit

英文名稱RatangiotensionIELISAKit大鼠血管緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

果菜類植酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKiongin人延伸蛋白規(guī)格：48T/96T
小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人維生素C(VC)ELISA試劑盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanchemerinELISA試劑盒人chemerinELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系基因檢測(cè)試劑盒20次

Humanserineprotease，PRSSELISAKit人*蛋白酶(PRSS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實(shí)驗(yàn)方法人上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人上腺素(EPI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人病蛋白(nephrin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝