當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞染色>> 甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,磷酸鹽法)100ml使用說明書
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更新時間:2017-07-06 09:54:59瀏覽次數(shù):182次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,磷酸鹽法)100ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,磷酸鹽法)100ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO
NTRK2 Others Canine 狗 TrkB / NTRK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Tul-1細(xì)胞,人肺癌細(xì)胞系 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞,WB-F344細(xì)胞 T-101B*(含100mL 酶解緩沖液)10mL
原代骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml
HUVEC-c pre-screened 預(yù)選型正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 500,000cells 大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CM-M042小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化培養(yǎng)基MCDM
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S3 細(xì)胞,Hela細(xì)胞 HEL299(紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0910
MESDC2 Others Human 人 MESDC2 / MESD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PRKCD Others Mouse 小鼠 PKC delta / PRKCD 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人骨骼肌細(xì)胞裂解物HSkMCL
小鼠畸胎瘤細(xì)胞;P19
Acc-3細(xì)胞,涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞 人胃癌細(xì)胞,BSG823細(xì)胞 犬胸腺細(xì)胞;cf2Th
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白(ANT)自身抗體免疫試劑盒 Human adenine nucleotide translocator(ANT)autoantibody ELISA kit
抗壞血酸(AsA)含量測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
RatMethemoglobin,MHBELISA試劑盒大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanheparin-bindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactor,HB-EGFELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanL-LactateDehydrogenase,L-LDHELISAKit人L-乳酸脫氫酶(L-LDH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人維生素B6(VB6)ELISA試劑盒
HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanc-fosELISA試劑盒人c-fosELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系基因定量檢測試劑盒20次
Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人*/*蛋白磷酸酶(STK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
甲苯胺藍(lán)染色液(0.5%,磷酸鹽法)100ml使用說明書人生長激素結(jié)合蛋白(P)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人生長激素(GH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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