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苯胺藍(lán)染色液100ml免費(fèi)代測(cè)

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更新時(shí)間:2017-07-06 09:52:46瀏覽次數(shù):149次

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苯胺藍(lán)染色液100ml免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
苯胺藍(lán)染色液100ml免費(fèi)代測(cè)注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
SGC7901(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

貓腎細(xì)胞;F81

DDR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 DDR2 Kinase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

LTPEP-a-2細(xì)胞,人肺腺癌細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞,VERO C1008 (E6)細(xì)胞 CM-M042小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞HCPEC

NHEK-c adult 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)成年單一捐獻(xiàn)者 500,000cells 原代骨細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
CL-0462UMR-106(大鼠骨肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人髓核細(xì)胞RNAHNPC miRNA5 μg

兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞;RCFBF 癌細(xì)胞,MCF7細(xì)胞 Cl.Ly1+2-/9細(xì)胞,小鼠T淋巴細(xì)胞

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
GPNMB Others Human GPNMB / HGFIN 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人骨骼肌成肌細(xì)胞cDNAHSkMM cDNA

3T3?L1 小鼠脂肪細(xì)胞

CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞

穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293E 人腎皮層上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠復(fù)制啟動(dòng)因子1(REPIN1)ELISA試劑盒 ,英文名: REPIN1 ELISA Kit

人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanalpha-fetoproteinLensculinarisagglutiin2,AFP-L2ELISAKit 96T/48T

大鼠溶質(zhì)載體家族2(易化葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白),成員2(SLC2A2)免疫試劑盒 Rat Solute carrier family 2,facilitated glucose transporter member 2,SLC2A2 ELISA kit

英文名稱RatEndothelialnitricoxidesynthase3ELISAKit大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)規(guī)格:96T/48T

基因靶標(biāo)技術(shù)試劑盒5

ELISAKitCK-20人細(xì)胞角蛋白20規(guī)格:48T/96T
小鼠γ基丁酸(GABA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat renin (Renin) ELISA Kit 大鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒

Humancalcineurin,CaNELISAKit 人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCCAAT/enhancerbindingproteindeta,C/EBPδELISA試劑盒人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米Bt176(maximizer)品系基因檢測(cè)試劑盒20

Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISAKit人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
苯胺藍(lán)染色液100ml免費(fèi)代測(cè)人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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