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更新時間:2017-07-06 09:47:47瀏覽次數(shù):167次
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脂褐素染色液(Long Ziehl-Neelsen法)4×50ml免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
脂褐素染色液(Long Ziehl-Neelsen法)4×50ml免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
RF/6A(猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S2
SIRPA Others Rat 大鼠 SIRP alpha / CD172a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
NCI-H292細(xì)胞,人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3細(xì)胞 CM-R071大鼠輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞HIBEpiC
Gibco 12680013 LHC-9 Medium (1X), Liquid 500 ml
人星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA tRNA
HAVCR2 Others Mouse 小鼠 TIM3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
黑化大家鼠肺成纖維細(xì)胞;NRm
CRL細(xì)胞,人胰腺癌細(xì)胞 人舌癌細(xì)胞,Tca-8113細(xì)胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5
IMR-32(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-21060 Airway Epithelial Cell GrowthMedium, 呼吸道上皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml
ENTPD2 Others Human 人 NTPDase 2 / ENTPD2 (aa 29-460) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人肝永生化細(xì)胞;THLE-3
CL-0388NCI-H157(人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,DU145細(xì)胞 SK-MES-1(人肺癌細(xì)胞)
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PG-LH7
CPM Others Human 人 CPM / Carboxypeptidase M 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體免疫試劑盒 Human cardiac myosin heavy chain (MHC) autoantibody ELISA kit
*還原酶(GR)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratmatrixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanhemochromatosistype2/uvenile-umanhomolog,HFE2LISAKit人青少年2型血色素沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlipolysaccharidebindingprotein,LBPELISAKit人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素13(IL-13)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat nerve growth factor (NGF) ELISA Kit 大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒
HumanCrosslaps,CrELISAKit 人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCaspase12,Casp-12ELISA試劑盒人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因棉花MON531品系基因檢測試劑盒20次
HumanskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit人橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脂褐素染色液(Long Ziehl-Neelsen法)4×50ml免費(fèi)代測人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人同型半胱酸(Hcy)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人鐵調(diào)素(Hepc)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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