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更新時間:2017-07-06 09:43:50瀏覽次數(shù):173次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
透明質(zhì)酸染色試劑盒100ml免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
透明質(zhì)酸染色試劑盒100ml免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
PA317(小鼠成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2
人腎小管上皮細胞;HKC
ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
NCI-H345細胞,人小細胞肺癌細胞 小鼠腦神經(jīng)瘤細胞,Neuro-2a細胞 CM-H119人腦膜細胞*培養(yǎng)基100mL
小鼠周神經(jīng)成纖維細胞MPNF
Promocell C-27439 Adipocyte Nutrition Medium KIT, 脂肪細胞營養(yǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml
CM-M089小鼠皮膚肥大細胞*培養(yǎng)基100mL
HFE2 Others Cynomolgus 食蟹猴 Hemojuvelin / HFE2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
尿道上皮細胞培養(yǎng)基UCM-prf
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-5 膀胱鱗癌細胞,ScaBER細胞 OS-RC-2(腎癌細胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0902
HAVCR1 Others Rat 大鼠 KIM1 / TIM1 / HAVCR1 人細胞裂解液 (陽性對照)
SIRPA Others Rat 大鼠 SIRP alpha / CD172a 人細胞裂解液 (陽性對照)
人肝內(nèi)膽管上皮細胞HIBEpiC
水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S2
NCI-H292細胞,人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) 小鼠成纖維細胞,3T3細胞 CM-R071大鼠輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
RF/6A(猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2
Gibco 12680013 LHC-9 Medium (1X), Liquid 500 ml
大鼠胰島素原(PI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人鋅α2糖蛋白(AZGP1)免疫試劑盒 Human AZGP1 ELISA kit
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 紫外分光光度法 25管/24樣
RatmammarycarcinomaMarker-CA153ELISA試劑盒大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISA試劑盒人幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLinkerforactivationofTcell,LAISAKit人T細胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
People deoxidizing urine three phosphoric acid (DUTP) ELISA Kit 人脫氧尿三磷酸(DUTP)ELISA試劑盒
HumanCalcitonin,CISAKit 人降鈣素(CT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humancarcinoembryonicantign,CEAELISA試劑盒人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
重組腺病毒效價比色法定量檢測試劑盒50次
HumansolubleClusterofdifferentiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
透明質(zhì)酸染色試劑盒100ml免費代測人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細胞毒素(CTX)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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