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更新時間:2017-07-06 09:41:39瀏覽次數(shù):117次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
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改良Van Gieson染色試劑盒200ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
改良Van Gieson染色試劑盒200ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞) 5×106cells/瓶×2
人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]
LAMP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP2 人細胞裂解液 (陽性對照)
SUNE-1亞株13-9B細胞,人鼻咽癌細胞系 小鼠胚胎成纖維細胞,BALB/3T3 clone A31細胞 CM-H063人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
肝細胞培養(yǎng)基HM
Promocell C-27020 Osteoblast MineralizationMedium, 成骨細胞礦化培養(yǎng)基(即用型) 500ml
人表皮角質(zhì)細胞-裂解物HEK-a L
HK3 Others Human 人 Hexokinase-3 / HK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人胃癌細胞;MGC-803
Tca-8113細胞,舌鱗癌細胞 人低分化胃癌細胞,BGC-823細胞 盤羊皮膚細胞;ASHS2
小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD6 Others Rat 大鼠 CD6 / TP120 人細胞裂解液 (陽性對照)
人干細胞因子單克隆抗體細胞株;AMS2(SCF3)
CM-H026人淋巴內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
HCT-8/VCR細胞,耐長春新堿結(jié)腸癌細胞系 人黑色素瘤細胞,HME6細胞 表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB
H4(人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CD274 Others Human 人 PD-L1 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅠ)ELISA試劑盒 ,英文名: CTXⅠ ELISA Kit
人新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA檢測試劑盒HumanNeonatalThyroxine,NN-T4ELISAKit 96T/48T
大鼠二胺氧化酶(DAO)免疫試劑盒 Rat diamine oxidase,DAO ELISA Kit
CLIAKitforTXB2ELISAKit大鼠血栓素B2規(guī)格:48T/96T
*時間(TT)檢測試劑盒20次
ELISAKitsCKR人可溶性細胞因子受體規(guī)格:48T/96T
小鼠白介素-33(IL-33)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
DHEA-S7 ELISA Kit 人DHEA-S7 ELISA試劑盒
HumanCyclinDependentKinase5,CDK5ELISAKit 人周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humancalumenin,CALUELISA試劑盒人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
重組逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)態(tài)表達細胞篩選試劑盒(HAT+潮霉素)10次
HumanSolubleIntercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
改良Van Gieson染色試劑盒200ml實驗方法人纖維母細胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人纖維膠凝蛋白2(FCN2)ELISA試劑盒 96T/48 試劑盒 組裝/原裝
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