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更新時間:2017-07-06 09:23:05瀏覽次數(shù):196次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)堿性磷酸酶染色試劑盒4×10ml免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
堿性磷酸酶染色試劑盒4×10ml免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
JeKo-1(人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK
REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Panc 10.05細(xì)胞,人胰腺腺癌細(xì)胞 人舌鱗癌細(xì)胞系,TSCCA細(xì)胞 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6
人無色素睫狀上皮細(xì)胞 cDNAHNPCEpiC cDNA
Promocell C-25020 Hepatocyte Maintenance Medium, 肝細(xì)胞維持培養(yǎng)液 500ml
人細(xì)胞;Hela 229 [HeLa229]
IFNB1 Others Mouse 小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CRT 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
MHCC-97H人肝癌細(xì)胞(高轉(zhuǎn)移) MHCC-97H human hepatoma cells (high transfer) DMEM+10%FBS
TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人晶狀體上皮細(xì)胞 (HLEpiC)( 5×105 ) HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系 Human
TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92 [NK92]
NCI-H446 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞
人臍動脈平滑肌細(xì)胞
人正常上皮細(xì)胞;MCF 10A 人胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)ELISA試劑盒 ,英文名: FOS ELISA Kit
人血管活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA檢測試劑盒Humanvasopeptidaseinhibitors,VPIELISAKit 96T/48T
大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)免疫試劑盒 Rat Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
英文名稱RatCCL1ELISAkit大鼠CCL1ELISAkit規(guī)格:96T/48T
藍(lán)色熒光細(xì)胞核染色分析試劑盒100次
ELISAKitFⅡ人*Ⅱ規(guī)格:48T/96T
小鼠促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat corticosterone / corticosterone (CORT) ELISA Kit 大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒
Humanapelin12,AP12ELISAKit 人apelin12(AP12)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanBcl-2associatedXprotein,BaxELISA試劑盒人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物種子活性葉綠體分離試劑盒20次
HumanT-cellacuymphoblasticleukemiaantigen,TALLA-1ELISAKit人T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
堿性磷酸酶染色試劑盒4×10ml免費(fèi)代測人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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