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更新時間:2017-07-06 09:21:02瀏覽次數(shù):209次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
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conn改良Weigert*4X50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
conn改良Weigert*4X50ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Hut-102(人皮膚T淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21
TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細胞裂解液 (陽性對照)
PC-2細胞,人胰腺癌細胞 人皮膚癌細胞系,HS-4細胞 小鼠黑色素瘤瘤株;B16
人食道上皮細胞總RNAHEEpiC tRNA
Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 內皮細胞生長培養(yǎng)基MV(即用型) 500ml
膀胱平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
IFNG Others Rat 大鼠 IFNG / Interferon Gamma 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠胎兒真皮成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
Vero非洲綠猴腎細胞 Vero the African green monkey kidney cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS
IFNW1 Protein Human 重組人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白 (His 標簽)
L Wnt-3A(小鼠皮下結締組織細胞) 5×106cells/瓶×2 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細胞)
人毛發(fā)基質細胞(HHZMC)( 5×105 )
人低分化肺腺癌細胞;GLC-82 [GLC82]
CL-0463UM-UC-3(人膀胱移行細胞癌)5×106cells/瓶×2
人腎癌細胞;A498 大鼠心肌成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
raw264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
PLA2G1B Others Mouse 小鼠 Phospholipase-A2 / PLA2G1B 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管緊張素Ⅱ(2-7)免疫試劑盒 Human angiotensin II(2-7)ELISA Kit
人抗Smith抗體(Sm)ELISA試劑盒 ,英文名: Sm ELISA Kit
RatLaminin,LNELISA試劑盒大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISA試劑盒人糖化蛋白(GSP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit人腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠催乳素(PRL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 人碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒
HumanComplementfragment3a,C3aELISAKit 人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISA試劑盒人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物脂質比色法定量檢測試劑盒20次
HumanTestoterone,ISAKit人睪同(T)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
conn改良Weigert*4X50ml實驗方法人重去甲上腺素(NE-B)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人相關抗原(TAA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人特異性抗原(TSA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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