我司線粒體深紅色熒光染色試劑盒BBcellProbe M021000T使用說明書本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽*的宗旨，為客戶提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購模式！我們將竭誠為您服務(wù),咨詢！
線粒體深紅色熒光染色試劑盒BBcellProbe M021000T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
線粒體深紅色熒光染色試劑盒BBcellProbe M021000T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Hep G2(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1

VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

PA319細(xì)胞，人大腸癌細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞,D407細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞;PC-3 [PC3]

人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCMEC miRNA5 μg

ACY1 Others Mouse 小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK-

IGFBP7 Others Human 人 IGFBP7 / IBP-7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

MA891瘤 癌

BT-549人管癌細(xì)胞 BT-549 human breast duct carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

VSTM1 Protein Human 重組人 VSTM1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2 人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人表皮黑色素細(xì)胞-中色素HEM-m

兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE)

QG-56細(xì)胞，人肺扁平上皮癌細(xì)胞 中國倉鼠倉鼠卵巢細(xì)胞亞株,CHO-K1細(xì)胞 CM-M010小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Saos-2(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 set
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