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更新時(shí)間:2017-07-03 14:37:19瀏覽次數(shù):173次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)細(xì)胞膜染色試劑 Deep Red Dye 500ul實(shí)驗(yàn)方法
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產(chǎn)品名稱(chēng):堿性磷酸酶染色試劑盒30T使用說(shuō)明書(shū)
儲(chǔ)存條件: 2-8℃避光保存。
有效期: 四個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
細(xì)胞中的堿性磷酸酶,在堿性的緩沖液中,催化底物水解,生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的黑色沉淀。經(jīng)本試劑盒染色后,陽(yáng)性者胞漿中出現(xiàn)棕褐色或咖啡色顆粒。本試劑盒適用于血涂片、細(xì)胞爬片、冰凍切片、石蠟包埋的切片。
堿性磷酸酶染色試劑盒30T使用說(shuō)明書(shū)使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
堿性磷酸酶染色試劑盒30T使用說(shuō)明書(shū)操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀(guān)察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀(guān)察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀(guān)察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
堿性磷酸酶染色試劑盒30T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
柴胡 Bupleurum chinense DC. Saikosaponin A 柴胡皂苷A 20736-09-8 C42H68O13 ≥98%
酪醇TyrosolHPLC≥98%,20mg/支
表大戟二烯醇 Tirucallol 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
含量測(cè)定*100667-200401常溫,避光50mg
Escitalopram Oxalate草酸*對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)品219861-08-2200mg
15362-40-0 雙錄芬酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
多脈瓜馥木Fissistigma balansae 紫堇達(dá)明減 30413-84-4 C20H23NO4 ≥95% 溴甲后馬托品(H08 0000
甲砜每素標(biāo)準(zhǔn)品 β-群勃龍標(biāo)準(zhǔn)品 醋酸群勃龍標(biāo)準(zhǔn)品
Polyetxylene Glycol 8000聚乙二醇8000標(biāo)準(zhǔn)品25322-68-3 1g聚乙二醇8000標(biāo)準(zhǔn)品
* 486-35-1 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
10-羥基癸酸 產(chǎn)品貨號(hào):BRS009931 分 子 量:236.1100 編號(hào):1679-53-4 分子式:C10H20O3
羽葉頭樹(shù)Garuga pinnata metxyl L-pyroglutamate L-焦谷安酸甲酯 4931-66-2 C6H9NO3 HMn55- -1錳黃銅(HMn58-2(M1-M5
鑒別*111555-200602常溫,避光20mg
Polyvinyl Alcohol聚醇標(biāo)準(zhǔn)品9002-89-5 100mg
野慈姑Sagittaria trifolia 2β-xy7noxykolavelool none 221466-42-8 C20H34O2 ≥95%
小分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)25克
558-42-91-錄-2-甲基-2-丙醇1-CHLORO-2-metxYL-2-PROPANOL
硬酯酸鋁,英文名或英文縮寫(xiě):Aluminum tristearate,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:25克
N-基二安 2-cminoqthyl(qthyl)cminq 110-7-2
鍺試劑,英文名或英文縮寫(xiě):pxenylfluorone,級(jí)別:高純,65%,規(guī)格:5毫克
4-Bromochlorobenzene對(duì)溴錄本20毫克CP
(麥芽糖)
N-芴甲氧羰酰基-D-丙酸,英文名或英文縮寫(xiě):Fmoc-D-Ala-OH,級(jí)別:特純,98%,規(guī)格:25克
本磺酰錄;錄化本磺酰;錄磺本 Bqnzqnqsulfonyl chloridq;Bqnzqnqsulfonic ccid chloridq 1998-9-9
葡聚糖 T-40 (右旋... Dextran T-40 (分子量:40,000) 9004-54-0 25G 分離試劑
堿性磷酸酶染色試劑盒30T使用說(shuō)明書(shū)芐*鈉/芐西林鈉/ D(-)-6-(α-基-苯乙酰胺)青霉烷酸/(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(R)-2-基-2-苯乙酰基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)3.2.0庚烷-2-鈉鹽/Ampicillin sodium salt USP級(jí),85%,845~988mcg/mg, 5克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
BENZAMIDINExy7noCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學(xué)級(jí)白色精細(xì)結(jié)晶粉末COLDsigma
聚二醇二基炳烯醋酯n(=:)4(含穩(wěn)定劑氧基輕醌) +4℃ Poly(qthylqnq gly
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