細(xì)胞培養(yǎng)用于遺傳學(xué)分析常見的是體外培養(yǎng)的細(xì)胞株，多為惡性腫瘤細(xì)胞株，且呈貼壁生長，僅小數(shù)細(xì)胞株為懸浮生長。培養(yǎng)細(xì)胞有來源易得、細(xì)胞分裂率高和染色體標(biāo)本制出清晰度高等優(yōu)點(diǎn)。組織細(xì)胞培養(yǎng)基染色體制備的關(guān)鍵是掌握好體外細(xì)胞的生長動(dòng)態(tài)，只有處在對(duì)數(shù)生*的細(xì)胞才能出現(xiàn)較高的分裂相，所以積水仙素處理的時(shí)機(jī)及量是染色體標(biāo)本形態(tài)及分裂指數(shù)的關(guān)鍵。
1、實(shí)驗(yàn)材料
培養(yǎng)基液（PRMI 1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養(yǎng)瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。
2、培養(yǎng)液配制
培養(yǎng)液85-95%
小牛血清5-15%
雙抗（選擇）100u/ml
3、操作過程
（1）培養(yǎng)基細(xì)胞：選擇處于指數(shù)生*、用大瓶培養(yǎng)的80-90%匯合單層培養(yǎng)細(xì)胞；
（2）終止培養(yǎng)：當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養(yǎng)混合液，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6-10小時(shí)以抑制分裂期細(xì)胞停止于分裂中期；
（3）聚集細(xì)胞：
（A）搖動(dòng)法：
可利用分裂中期細(xì)胞培養(yǎng)基變圓與底物附著不牢特點(diǎn)，此時(shí)可持培養(yǎng)瓶，左右反復(fù)橫向水平搖動(dòng)，可使90%的中期分裂細(xì)胞從瓶壁脫落；
（B）消化法：
將培養(yǎng)液倒入離心管內(nèi)，給培養(yǎng)瓶內(nèi)加0.025%*液0.5-1ml/瓶，水平左右搖動(dòng)，便培養(yǎng)瓶底壁面*接觸消化酶，稍后用彎頭吸管吹打，待細(xì)胞*脫落后，加入3-5ml前培養(yǎng)終止消化。用吸管移入裝有培養(yǎng)基液的離心管內(nèi)2000rpm10分鐘。棄上清液，留沉淀細(xì)胞；
（4）低滲處理：給沉淀細(xì)胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均勻，在溫箱中靜置20-30分鐘；
（5）預(yù)固定：向低滲處理適當(dāng)?shù)碾x心管中加新鮮配制的3∶2甲醇，冰乙醇固定液1-2ml，用吸管輕松吹打調(diào)勻，此措施能起到使細(xì)胞表面輕微固定，可防止固定后細(xì)胞培養(yǎng)基粘連成塊。
（6）細(xì)胞培養(yǎng)固定：800-1000rpm10分鐘，棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml，加入時(shí)要沿管壁慢慢加入，后輕輕吹打，封口后室溫靜置30分鐘以上，反復(fù)三次；
（7）制片：末次離心后，倒掉上清液，留沉淀細(xì)胞，加新鮮配制固定液0.5ml左右，混勻后*制片，其它同外周血方法。
中藥對(duì)照藥材    卷柏(墊狀卷柏）    2.0g.    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    麥芽    10.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    花椒    2.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    蘆根    1.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    扶芳藤    10.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    伸筋草    1.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    雞冠花    2.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    苦楝皮    2.0g    中藥對(duì)照藥材
細(xì)胞培養(yǎng)