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細胞培養(yǎng)初代消化培養(yǎng)法

時間:2018-3-21閱讀:748
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1.細胞培養(yǎng)準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。

3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青*的混合液中30~60分鐘。

4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的*液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。

8.細胞培養(yǎng)培養(yǎng):置于36.5℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
含量測定    含量:    進口/國產(chǎn)    D-木糖    20mg/支    英文名稱    111508-200404    規(guī)格:
含量測定    含量:    進口/國產(chǎn)    三十烷醇    20mg/支    英文名稱    111509-200302    規(guī)格:
含量測定    含量:    進口/國產(chǎn)    愈創(chuàng)木酚    20mg/支    英文名稱    111510-200202    規(guī)格:
含量測定    含量:    進口/國產(chǎn)    濱蒿內(nèi)酯    20mg/支    英文名稱    111511-200001    規(guī)格:
含量測定    含量:    進口/國產(chǎn)    異龍腦    20mg/支    英文名稱    111512-200201    規(guī)格:
鑒別    含量:    進口/國產(chǎn)    漢黃芩素    20mg/支    英文名稱    111514-200403    規(guī)格:
鑒別    含量:    進口/國產(chǎn)    甜菊苷    20mg/支    英文名稱    111515-200001    規(guī)格:
細胞培養(yǎng)

 

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