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細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟

時間:2017-12-4閱讀:108
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1. 細(xì)胞培養(yǎng)潛伏期(latent phase) :

接種 經(jīng)過 懸浮期(細(xì)胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。

初代培養(yǎng)細(xì)胞 經(jīng)過 10~24小時或更多時間。 連續(xù)細(xì)胞系和癌細(xì)胞系 經(jīng)過 10~30分鐘 貼附。 貼附現(xiàn)象是一個非常復(fù)雜和受多種因素的影響。 影響細(xì)胞貼附:底物表面不干凈,影響細(xì)胞貼附。 利于細(xì)胞貼附:底物表面帶有陽性物質(zhì)與特殊物質(zhì):
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、 

細(xì)胞表面蛋白(cell surface proteinCSP) 

這些物質(zhì)有的存在與細(xì)胞表面,有的來自血清。 

潛伏期特點(diǎn): 

長短與細(xì)胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。 

(1)細(xì)胞貼附后進(jìn)入潛伏期,細(xì)胞無增殖。少見分裂相,細(xì)胞有運(yùn)動活動。 

(2)初代培養(yǎng) 細(xì)胞潛伏期約為24~96小時或更長, 

連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期約6~24小時。 

(3)細(xì)胞接種密度大潛伏期短。

(4)細(xì)胞出現(xiàn)分裂相增多時,標(biāo)志細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增生期。

2.指數(shù)增生期(logarithmic growth phase): 

特點(diǎn):細(xì)胞增殖旺盛階段,分裂相增多。

細(xì)胞分裂指數(shù)(mitotie index MI) : 

表示每1000個細(xì)胞中的分裂相數(shù)。 

條件:分裂相數(shù)與細(xì)胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關(guān)。

細(xì)胞分裂指數(shù): 

初代細(xì)胞:在0.1%~0.5%之間% ,

連續(xù)分裂細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞:3 ~5%。 

指數(shù)增生期是作為細(xì)胞一代活力的時期,是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和主要的階段。 

指數(shù)增生期持續(xù)3~5天,細(xì)胞數(shù)量增多后生長空間變小,細(xì)胞相互接觸可連接成片。

正常細(xì)胞:細(xì)胞相互接觸能抑制細(xì)胞運(yùn)動,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。 

腫瘤細(xì)胞:沒有這種現(xiàn)象,可作為區(qū)別正常與腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細(xì)胞達(dá)到一定密度后向三維空間發(fā)展,使細(xì)胞發(fā)生堆積(piled up)。 

由于細(xì)胞不斷增殖分裂,細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增多,培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多,細(xì)胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。 

3.停滯期(stagnate phase) 

細(xì)胞量和密度達(dá)到飽和,細(xì)胞停滯增殖。表明細(xì)胞進(jìn)入到停滯期,細(xì)胞數(shù)量持平,也稱為平頂期(plateau)。 

特點(diǎn):細(xì)胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細(xì)胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞會從底物脫落死亡。 

注意:

細(xì)胞培養(yǎng)傳代過晚將影響下一代細(xì)胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細(xì)胞和受損較輕的細(xì)胞。待細(xì)胞全部恢復(fù)后再用。
*標(biāo)準(zhǔn)品    1218-35-5     125mg    Xylometazoline Hydrochloride  
*標(biāo)準(zhǔn)品    1397-89-3    125mg        
*標(biāo)準(zhǔn)品    298-59-9     125mg        
鹽酸氟*庚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品    3105-68-8     125mg        
*標(biāo)準(zhǔn)品    81403-68-1    150mg    Alfuzosin Hydrochloride    
*標(biāo)準(zhǔn)品        150mg    Amifostine    
甲磺酸溴隱亭標(biāo)準(zhǔn)品    22260-51-1    150mg    Bromocriptine Mesylate    
*標(biāo)準(zhǔn)品    1950/4/4    150mg    Cortisone Acetate    
敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品    62-73-7    150mg    Dichlorvos (AS)    
二羥苯宗標(biāo)準(zhǔn)品    131-53-3    150mg    Dioxybenzone    
恩他卡朋標(biāo)準(zhǔn)品    130929-57-6    150mg    Entacapone    
*標(biāo)準(zhǔn)品    57-63-6    150mg    Ethinyl Estradiol    
環(huán)丙羧酸標(biāo)準(zhǔn)品    86393-33-1     150mg    Fluoroquinolonic Acid  
細(xì)胞培養(yǎng)   

 

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