細(xì)胞凋亡檢測的早期形態(tài)學(xué)改變是核染色質(zhì)濃聚、固縮,聚集在核膜周邊，然后是胞漿濃縮、胞膜起泡,繼而細(xì)胞核裂解成若干碎片，細(xì)胞膜將胞質(zhì)和染色質(zhì)斷片包裹，胞漿內(nèi)形成多個膜結(jié)構(gòu)尚完整的“小泡”及 “凋亡小體” (apoptoticbody)。這不同于細(xì)胞壞死的細(xì)胞腫脹、胞膜破裂、細(xì)胞崩解。
       根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，至今為止，已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。
       一、光學(xué)顯微鏡觀察

       凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時可碎裂。在HE染色的組織切片中細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)致密、嗜酸性染色增強，并可形成凋亡小體。在組織中凋亡細(xì)胞常以分散單個形式存在，凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞分離，不引起炎癥反應(yīng)。
本方法簡便易行，但在細(xì)胞密集的組織中對于改變不典型的細(xì)胞判斷較困難，常缺乏較為特征的指標(biāo)，具有較強的主觀性，重復(fù)性差。本方法可用于調(diào)亡現(xiàn)象的初步觀察，作為分析指標(biāo)之一。
       檢測方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測量工具可作凋亡細(xì)胞計數(shù)。
       二、視頻時差顯微技術(shù)
       此方法用于細(xì)胞培養(yǎng)，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。凋胞與基質(zhì)分離，胞體變圓、收縮、出泡，有的細(xì)胞拉長，出現(xiàn)釘狀突起，特續(xù)數(shù)小時后細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞溶解，通過連續(xù)觀察，本方法可養(yǎng)壑培養(yǎng)中的凋亡細(xì)胞，但不能用于病理組織。
       檢測方法：收集2×105細(xì)胞/ml培胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動態(tài)改變，每隔分鐘30秒作序列攝影，連續(xù)24小時。如同進進行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。
       三、電子顯微鏡觀察
雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡經(jīng)典、可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。
缺點：
       (1)只能定性,不能定量;
       (2)標(biāo)本處理過程復(fù)雜,設(shè)備相對昂貴,對檢查者的技術(shù)水平要求較高,不適于大批標(biāo)本檢測;
       (3)在組織切片上進行電鏡觀察時,有時凋亡很難與正常細(xì)胞有絲分裂相鑒別,因為兩種情況下都可出現(xiàn)染色質(zhì)濃聚。如同時進行熒光染色,可彌補電鏡檢查的不足。
       細(xì)胞凋亡檢測檢測方法：透射電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級脫水，CO2臨界點干燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。
Benzaldehyde (List Chemical)    苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)品    100-52-7    1ml
Poloxamer Liquid    泊洛沙姆液標(biāo)準(zhǔn)品    9003/11/6    1ml
Phenylethyl Alcohol     苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品    1960/12/8    1ml
    間甲酚        1ml
Lutein     葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品        1ml
    蒼白松果菊標(biāo)準(zhǔn)品    97281-15-7    1g
Powdered Ashwagandha Extract    醉茄粉末提取物標(biāo)準(zhǔn)品    90147-43-6    1g
Polyoxyl 20 Stearyl Ether (AS)    聚氧乙烯硬脂酸酯20標(biāo)準(zhǔn)品    9005-00-9     1g
Polyoxyl 2 Stearyl Ether (AS)    聚氧乙烯硬脂酸酯2標(biāo)準(zhǔn)品    9005-00-9     1g
Polyoxyl 10 Stearyl Ether    聚氧乙烯硬脂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品    9005-00-9     1g
細(xì)胞凋亡檢測