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線粒體在細(xì)胞凋亡檢測(cè)中的作用

時(shí)間:2018/1/25閱讀:183
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線粒體在細(xì)胞凋亡檢測(cè)的過(guò)程中起著樞紐作用,細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡,而線粒體跨膜電位的下降,被認(rèn)是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中早發(fā)生的事件,它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之,旦線粒體DYmt崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)線粒體跨膜電位的存在,使一些親脂性陽(yáng)離子熒光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可結(jié)合到線粒體基質(zhì),其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。
方法:將正常培養(yǎng)的細(xì)胞和誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞加入使用終濃度為Rhodamine 123(1mM)或終濃度為DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式細(xì)胞計(jì)檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。
注意事項(xiàng):
1. 細(xì)胞凋亡檢測(cè)始終保持平衡染液中pH值的一致性,因?yàn)閜H值的變化將影響膜電位。
2. 與染料達(dá)到平衡的細(xì)胞懸液中如果含有蛋白,他們將與部分染料結(jié)合,降低染料的濃度,引起假去極化。
 艾滋病病毒IgG    小鼠巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)
 氨基末端激酶2IgG    小鼠巨噬來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)
 氨基末端激酶3IgG    小鼠巨噬集落刺激因子(M-CSF)
 氨肽酶NIgG    小鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9) 
 按蚊IgG    小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)
 白介素10IgG    小鼠解脲脲原體(UU-Ab) 
 白介素11IgG    小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
 白介素12IgG    小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR) 
 白介素13IgG    小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
細(xì)胞凋亡檢測(cè)

 

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