Cas9穩(wěn)定表達的人結(jié)直腸腺癌細胞；HCT116-Cas9-567操作步驟操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

細胞名稱   Cas9穩(wěn)定表達的人結(jié)直腸腺癌細胞；HCT116-Cas9-567操作步驟
形態(tài)特性 上皮樣；多角

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使HCT116細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS；2ug/ml Puromycin

傳代方法 1:3傳代；3~4天1次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）

STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：7,10；D12S391：17,22；D13S317：10,12；D16S539：11,13；D18S51：17,17；D19S433：12,13；D21S11：29,30；D2S1338：16,16；D3S1358：12,19；D5S818：10,11；D6S1043：13,13；D7S820：11,12；D8S1179：12,14；FGA：18,23；Penta E：13,14；TH01：8,9；TPOX：8,8；vWA：17,22；

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

Cas9穩(wěn)定表達的人結(jié)直腸腺癌細胞；HCT116-Cas9-567操作步驟細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應如何解凍？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細胞大都無法立即適應， 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
人心臟微血管內(nèi)皮細胞裂解物HCMECL

TIMD4 Others Human 人 TIMD4 / TIM4 人細胞裂解液 (陽性對照)

BHK 敘利亞倉鼠腎細胞

CL-0158MGC80-3(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞;CGM1 人尿道上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
B18R Others Vaccinia Virus 牛痘病毒 B18R / B19R 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

CM-H031人食管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

子宮平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B 人肝癌細胞，SK-HEP-1細胞 95-D(高轉(zhuǎn)移肺癌細胞)

人骨肉瘤細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]

TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H031人食管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

B18R Others Vaccinia Virus 牛痘病毒 B18R / B19R 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

子宮平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B 人肝癌細胞，SK-HEP-1細胞 95-D(高轉(zhuǎn)移肺癌細胞)

人骨肉瘤細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]

TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人細胞裂解液 (陽性對照)
0.1%呂氏堿性美藍染色液5ml*6支/盒用于酵母菌鏡檢染色。  進口分裝  正丙醇(農(nóng)殘級)  Propanol  號：  71-23-8  質(zhì)量規(guī)格：  農(nóng)殘級

沙氏葡萄糖肉湯（SDB）  進口分裝  甲基反*甲酯(分析標準品)  Methyl linolelaidate  號：  2566-97-4  質(zhì)量規(guī)格：  分析標準品

VioletRedBileGlucoseAgar  進口分裝  1,2,3,4-四苯標準溶液(1000μg/ml,溶劑:)  1,2,3,4-Tetrachl
小鼠β基己糖苷酶elisa試劑盒  進口分裝  辣椒平  Capsazepine  號：  138977-28-3  質(zhì)量規(guī)格：  >98%,美國進口

小鼠前列腺酸性磷酸酶elisa試劑盒  進口分裝  *  Amiloride hydrochloride   號：  17440-83-4  質(zhì)量規(guī)格：  >98.5%,水合物

小鼠糖原合成酶激酶elisa試劑盒  進口分裝  *(標準品)  Amiloride hydrochloride   號：  17440-83-4  質(zhì)量規(guī)格：  含量測定

小鼠雄烯二elisa試劑盒  進口分裝  3，5-二基-6-吡嗪-2-羧酸甲酯（標準品）  Methyl 3,5-diamino-6-chloropyr-2-carboxylate  號：  1458-01-1  質(zhì)量規(guī)格：  檢查
Cas9穩(wěn)定表達的人結(jié)直腸腺癌細胞；HCT116-Cas9-567操作步驟大鼠脂聯(lián)素受體2  進口分裝  Garcinone E  Garcinone E  112649-21-5  C28H32O6  ≥98%

大鼠半胱天冬蛋白酶7  進口分裝  Psoracorylifol A  Psoracorylifol A  879290-97-8  C18H24O3  ≥98%

大鼠胱抑素C  進口分裝  Torachrysone  Torachrysone  22649-04-3  C14H14O4  ≥98%

大鼠環(huán)氧合酶2  進口分裝  3,4,5-Trimethoxycinnamic acid  3,4,5-Trimethoxycinnamic acid  90-50-6  C12H14O5  ≥98%

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