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生物菌種操作時應(yīng)注意的事項
(1)劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現(xiàn)*閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區(qū)域內(nèi)進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進行:
① 標(biāo)本處理區(qū),包括擴增摸板的制備;
②PCR擴增區(qū),包括反應(yīng)液的配制和PCR擴增;
③ 產(chǎn)物分析區(qū),凝膠電泳分析,產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。
各工作區(qū)要有一定的隔離,操作器材,要有一定的方向性。如:標(biāo)本制備→PCR擴增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。
切記:產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個工作區(qū)。
(2)分裝試劑:PCR擴增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺或負壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴增后的DNA和其他來源的DNA:
①PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產(chǎn)物區(qū)配制;
③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲存,分裝時應(yīng)標(biāo)明時間,以備發(fā)生污染時查找原因。
(3) 實驗操作注意事項 盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
① 戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
② 使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
③ 避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
④ 操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的度;
⑤ *后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
⑥ 操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器*容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
⑧ 重復(fù)實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。
生物菌種*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅩ ELISA Kit
*Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅨ ELISA Kit
*Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒 ,英文名: Ⅷ-Ag ELISA Kit
*Ⅷ(FⅧ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅧ ELISA Kit
*Ⅶ(FⅦ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅦ ELISA Kit
*Ⅴ(FⅤ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅤ ELISA Kit
*Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅢ ELISA Kit
*Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅡ ELISA Kit
*原肽段1+2(F1+2)ELISA試劑盒 ,英文名: F1+2 ELISA Kit
*原前體蛋白(PIVKA-II)ELISA試劑盒 ,英文名: PIVKA-II ELISA Kit
*原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒 ,英文名: F1+2 ELISA Kit
*原(PT)ELISA試劑盒 ,英文名: PT ELISA Kit
*血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒 ,英文名: T-TM ELISA Kit
*受體(TR)ELISA試劑盒 ,英文名: TR ELISA Kit
*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 ,英文名: TSP-1 ELISA Kit
*抗*復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒 ,英文名: TAT ELISA Kit
*(TM)ELISA試劑盒 ,英文名: TM ELISA Kit
*(Thrombin)ELISA試劑盒 ,英文名: Thrombin ELISA Kit
凝溶膠蛋白(GS)ELISA試劑盒 ,英文名: GS ELISA Kit
凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒 ,英文名: Gelsolin ELISA Kit
凝聚素(CLU)ELISA試劑盒 ,英文名: CLU ELISA Kit
凝膠原蛋白(gelson)ELISA試劑盒 ,英文名: gelson ELISA Kit
尿腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)ELISA試劑盒 ,英文名: TRAIL-DR4 ELISA Kit
尿游離*(UFC)ELISA試劑盒 ,英文名: UFC ELISA Kit
尿微量白蛋白(MAU/ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU/ALB ELISA Kit
尿微量白蛋白(MAU)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU ELISA Kit
尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: ALB ELISA Kit
尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)ELISA試劑盒 ,英文名: UreC ELISA Kit
*核苷磷酸化酶1(UPP1)ELISA試劑盒 ,英文名: UPP1 ELISA Kit
*型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA ELISA Kit
*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 ,英文名: PLAUR/uPAR ELISA Kit
生物菌種
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