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海洋微生菌種物注意事項(xiàng)
⒈ 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
⒉ 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
⑴ 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當(dāng)前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
⑵ 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
⑶ 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
⑷ 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是當(dāng)前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
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人色氨酰tRNA合成酶(WARS)ELISA試劑盒 Cyclin-D2(Mouse Cyclin-D2) ELISA Kit 小鼠細(xì)胞周期素D2 進(jìn)口/分裝
人己糖激酶3(HK3)ELISA試劑盒 CgA(Human Chromogranin) ELISA Kit 人嗜鉻蛋白A 進(jìn)口/分裝
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人尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA試劑盒 Cyt-C ELISA Kit 大鼠* 進(jìn)口/分裝
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人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)ELISA試劑盒 Ang- I ELISA Kit 大鼠血管緊張素Ⅰ 進(jìn)口/分裝
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒 Cyclin-D1(Mouse Cyclin-D1) ELISA Kit 小鼠細(xì)胞周期素D1 進(jìn)口/分裝
人絲裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA試劑盒 MBP(Mouse myelin basic protein) ELISA Kit 小鼠髓磷脂堿性蛋白 進(jìn)口/分裝
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人T細(xì)胞特異性鳥苷三磷酸酶(Tgtp)ELISA試劑盒 MC Ab ELISA Kit 大鼠黑色素細(xì)胞抗體 進(jìn)口/分裝
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人肽酰脯氨酰異構(gòu)酶(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)ELISA試劑盒 PAP(Mouse Prostatic Acid Phosphatase) ELISA Kit 小鼠前列腺酸性磷酸酶 進(jìn)口/分裝
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人血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)ELISA試劑盒 C3a ELISA Kit 大鼠補(bǔ)體片斷3a 進(jìn)口/分裝海洋微生菌種物
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