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生物制藥微課堂｜宿主細(xì)胞殘留蛋白分析，如何獲得更佳結(jié)果？

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LCMS分析方法越來越多的用于宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的分析，HCP分析的難點(diǎn)見往期wei信稿“生物制藥微課堂|第二期-宿主細(xì)胞殘留蛋白如何分析？”。如何獲得優(yōu)秀的基于LC-MS的HCP分析結(jié)果? 答案將在本期分享的兩場關(guān)于HCP的LCMS分析的網(wǎng)絡(luò)講座，每場都有詳細(xì)的樣品前處理，LCMS方法和數(shù)據(jù)處理的詳細(xì)介紹，可謂干貨滿滿，供有需求的老師參考。

Webinar 1: 

Data Visualizations for Routine Host Cell Protein Analysis by LCMS

講師介紹

博士：

Andrew Williamson

賽默飛生物制藥銷售專家

Andrew Williamson博士是賽默飛生物制藥銷售專家。在此之前，Andrew在賽默飛公司擔(dān)任蛋白質(zhì)組學(xué)專家，此前他在曼徹斯特大學(xué)克里斯蒂醫(yī)院的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作并管理該實(shí)驗(yàn)室。在此期間，安德魯從事了許多基于腫瘤項(xiàng)目的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，研究zhi療的關(guān)鍵指標(biāo)和生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。在此期間，Andrew還與合作者合作分析了多種干細(xì)胞和癌癥樣本，包括小鼠、人和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。

講師介紹
 

博士：

Michelle English

Protein Metrics Inc.

的成功科學(xué)家

Michelle English 博士是Protein Metrics Inc.的客戶成功科學(xué)家，在該公司，她專注于幫助客戶使用質(zhì)譜對早期和后期產(chǎn)品表征。在加入Protein Metrics公司之前，Michelle是輝瑞公司的一名科學(xué)家，并在弗吉尼亞大學(xué)的Hunt實(shí)驗(yàn)室工作。

看點(diǎn)：

HCP的完整解決方案及可視化的數(shù)據(jù)展示

生物藥生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生產(chǎn)品不需要的宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCP)，大部分HCP可以通過純化去除。監(jiān)管指南規(guī)定在上市前必須確定生物藥中殘留的HCP水平。LC-MS技術(shù)在過去幾年中得到了快速發(fā)展，但迄今為止該技術(shù)對分析人員專業(yè)技能要求高和需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行手工分析。分析挑戰(zhàn)包括樣品寬動(dòng)態(tài)范圍，極低的HCP豐度，差的序列覆蓋率，等等。此外，假陽性和假陰性一樣危險(xiǎn)，會造成不能重現(xiàn)，這也阻礙了LC-MS成為常規(guī)的HCP分析手段。

講座關(guān)鍵點(diǎn)：

01.為什么LC-MS在生物藥分析中越來越常用

02.如何對非質(zhì)譜專家用戶有效的展示數(shù)據(jù)

03.如何更快提供可信的結(jié)果

該報(bào)告詳細(xì)介紹了樣品前處理方法、LC-MS方法和數(shù)據(jù)處理。非變性SMART Digest酶解能去除大部分主成分，提高HCP鑒定的數(shù)目。高靈敏度和采集速度快的Orbitrap Exploris 480 質(zhì)譜儀進(jìn)一步提高HCP鑒定數(shù)目，并且重現(xiàn)性好。軟件Proteome Discoverer和Protein metrics用于數(shù)據(jù)的分析，得到可視化好的HCP鑒定和相對定量的結(jié)果和報(bào)告。

流程化的數(shù)據(jù)處理

（點(diǎn)擊查看大圖）

Webinar 2: 

A Data-Independent Acquisition (DIA) library based approach for Host cell protein analysis on the Thermo Scientific Orbitrap platform

講師介紹
 

博士：

Ian Anderson

賽默飛生物制藥銷售專家

Ian Anderson博士在Allergan工作了6年多，專注于從抗體到基因zhi療載體等多種生物制藥產(chǎn)品的質(zhì)譜鑒定。在此之前，他在SGS-M-Scan工作，開發(fā)用于表征生物藥品和生物仿制藥的新型質(zhì)譜方法。

看點(diǎn)：

基于DIA采集模式的HCP分析

現(xiàn)在用于HCP分析方法，絕大部分用的是數(shù)據(jù)依賴性采集（DDA）的方法。數(shù)據(jù)非依賴性采集（DIA）與DDA相比，不丟失任何信息、靈敏度更高，適合用于HCP分析。該報(bào)告講解了基于Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos三合一質(zhì)譜儀和Orbitrap Exploris 480質(zhì)譜儀開發(fā)HCP的DIA方法，以及如何在兩個(gè)質(zhì)譜系統(tǒng)設(shè)置合適參數(shù)。該報(bào)告將詳細(xì)介紹好的HCP數(shù)據(jù)庫如何建立以及構(gòu)建該庫的*方式，并列舉了如何在生物制藥過程開發(fā)中使用該方法的例子。

講座關(guān)鍵點(diǎn)：

01.討論基于高分辨質(zhì)譜平臺的HCP分析方法

02.演示使用DIA方法進(jìn)行HCP的分析

03.該方法在生物制藥開發(fā)過程中應(yīng)用

DIA分析LCMS平臺

本報(bào)告詳細(xì)介紹了DIA采集模式用于HCP分析的方法建立。DDA是好的建立譜圖庫的數(shù)據(jù)采集模式，數(shù)據(jù)不丟失、高靈敏度的DIA采集的數(shù)據(jù)可以檢索該譜圖庫從而得到可信的HCP鑒定結(jié)果。本報(bào)告對DDA和DIA的質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置進(jìn)行了詳細(xì)的解讀，且該方法可以在Orbitrap Fusion Lumos三合一質(zhì)譜儀和Orbitrap Exploris 480質(zhì)譜儀相互轉(zhuǎn)移，表明該方法的穩(wěn)健性好、重復(fù)性好。

DIA 用于HCP分析的實(shí)驗(yàn)流程

（點(diǎn)擊查看大圖）

使用Orbitrap高分辨質(zhì)譜平臺Exploris 480和Orbitrap Fusion Lumos，能夠?qū)崿F(xiàn)鑒定靈敏度及動(dòng)態(tài)范圍的進(jìn)一步提高。那么如何進(jìn)行合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)？質(zhì)譜方法的參數(shù)設(shè)置？鑒定結(jié)果可做到什么程度？這些問題都會在以上報(bào)告中給出答案，精彩不要錯(cuò)過！

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