賽默飛色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70 kg/cm2 時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過(guò)拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
賽默飛色譜柱的活化操作,以常見(jiàn)的C18反相分析柱為例,出廠時(shí)一般都封裝有甲醇或乙腈等有機(jī)溶劑。隨著時(shí)間的推移,色譜柱內(nèi)的有機(jī)溶劑緩慢揮發(fā),色譜柱內(nèi)可能出現(xiàn)氣泡。因此,新購(gòu)買的色譜柱在使用前一般都要進(jìn)行活化操作。
下面以常見(jiàn)的4.6mmX150mm,5μm粒徑的C18反相分析柱為例:
1.在活化色譜柱前,應(yīng)先用相關(guān)試劑沖洗液相系統(tǒng)的流路,確保無(wú)污染物殘留。切換至封柱試劑(一般為甲醇或乙腈),置換流路內(nèi)的試劑。
2.停泵,將分析柱的進(jìn)液口連上系統(tǒng),移除出液口的堵頭,出液口不連上系統(tǒng)。傾斜放置色譜柱,使其出液口高于入液口。
3.以0.1ml/min的流速?zèng)_洗色譜柱約5分鐘,切換至0.2ml/min的流速繼續(xù)沖洗。觀察色譜柱出液口,若連續(xù)出液,停泵,將色譜柱出液口接入液相系統(tǒng)。
4.以0.1ml/min的流速?zèng)_洗色譜柱,5分鐘內(nèi)將流速平穩(wěn)提升至0.5ml/min繼續(xù)沖洗色譜柱。
5.以0.5ml/min的流速?zèng)_洗色譜柱,期間觀察壓力與基線是否平穩(wěn),直到?jīng)_洗的總流量達(dá)到30個(gè)柱體積。
6.活化完成。對(duì)于久置不用的類似型號(hào)色譜柱,再次使用前也可參考上述步驟進(jìn)行活化。
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