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　　高效液相色譜儀是利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學作用性能的差異，使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到上述各作用力而達到相互分離。液相色譜儀在食品分析、環(huán)境分析、生命科學、醫(yī)學檢驗和無機分析等領域得到廣泛使用。一般來說，80%～85% 的有機物原則上可采用液相色譜儀分析。
 

　　高效液相色譜儀是以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術(shù)。現(xiàn)如今，液相色譜法應用非常廣泛，像是高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的有機化合物都可以用液相色譜儀來測定，比氣相色譜的局限性小很多。流動相就像是一條延綿不斷的河流，從儲液瓶出發(fā)，經(jīng)過脫氣機，混合比例閥再到色譜柱，檢測器，最后流到了廢液桶。如果它不純凈或被污染的話，那整個液相都會波及到。下面小編就帶大家一塊來學習一下使用流動相時的注意事項吧。
 

　　一、流動相試劑的選擇：
 

　　1.色譜純。液相色譜儀所用的試劑必須是色譜純級別的，而且使用之前需要抽濾經(jīng)過0.45um或者0.22um的微孔濾膜，除去試劑中的細小顆粒和其他雜質(zhì)，以免溶劑殘留的雜質(zhì)在色譜柱長期累積，降低柱效和壽命。
 

　　2.粘度。一般要求流動相的粘度應小于2cp，若使用高粘度溶劑，勢必會增高柱壓，不利于分離。常用的低粘度溶劑有乙腈、丙酮、乙醇等。
 

　　3.溶解性。溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性，符合相似相溶的原則，以免樣品沉淀在系統(tǒng)中特別是色譜柱中，日積月累降低柱效。
 

　　4.溶劑要與檢測器匹配。對于紫外吸收檢測器，應注意選用的檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。截止波長是指某一個特定的波長,超過這個波長的紫外線,紫外檢測器對其幾乎不響應,或者說響應很小。對于示差檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，來達到好的靈敏度。
 

　　5.緩沖鹽和PH。用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，來抑制樣品目標物的解離，增加目標物在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。一般樣品溶液是酸性時，會在流動相中加入少量甲酸，醋酸或者磷酸來提高液相的分離度和改善峰形，但一定注意流動相的PH在色譜柱的耐受酸堿度范圍內(nèi)。樣品溶液是堿性時則相反?？梢愿鶕?jù)目標物的pKa來確定pH，根據(jù)pH選擇緩沖鹽的種類，常用的緩沖鹽溶液有乙酸銨，磷酸鹽，三乙胺等。
 

　　二、流動相的儲存：
 

　　1.流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。和waters液相配套的一般都是玻璃瓶。
 

　　2.流動相的存放時間一般不超過24h，現(xiàn)配現(xiàn)用是安全的，特別是緩沖鹽溶液，如乙酸鹽等，極容易產(chǎn)生沉淀和滋生微生物長霉。長期積累的微生物會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀“毛毛”粘附在溶劑濾頭上，損壞濾頭，然后進入真空腔和比例閥甚至是色譜柱中，最終損壞一連串的儀器配件和耗材。因此緩沖鹽的流動相最好是現(xiàn)配現(xiàn)用，抽濾脫氣(一般是超聲波脫氣)，不要貯存，使用完后仔細刷洗儲液瓶，然后準備下一次的使用。
 

　　3.儲液瓶一定要蓋嚴，最好用原裝配套的蓋子，一是防止溶劑，特別是有機溶劑的揮發(fā)引起組分變化，導致保留時間的改變，二是防止二氧化碳溶入流動相中，影響流動相的PH值。