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人胚腎細胞;293 HEK-293操作步驟

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更新時間:2017-06-02 10:37:07瀏覽次數(shù):165次

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人胚腎細胞;293 [HEK-293]操作步驟
培養(yǎng)的前一周內出現(xiàn)質量問題, 客戶可憑細胞的照片以及書面形式的細胞培養(yǎng)實驗操作過程提供給我公司。 經(jīng)公司技術人員核實認定為可以予以重發(fā)的情況,由公司再免費提供一次細胞。

公司專注于細胞培養(yǎng)及細胞銷售的細胞生物學技術研發(fā)的高科技企業(yè),主要擁有復蘇及凍存細胞及相關技術服務,公司主要為細胞生命科學研究人員提供有效的、技術培訓、人胚腎細胞;293 [HEK-293]操作步驟
售后服務,其細胞主要來源ATCC、Riken、ScienCell、Invitrogen、ECACC、ACC等細胞庫,以及部分國內外細胞研究機構建系。
細胞名稱 人胚腎細胞;293 [HEK-293]操作步驟
形態(tài)特性  上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性  293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞。 此細胞包含并表達轉染的Ad5基因。 需在生物安全2級實驗室操作。
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質胎牛血清,10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 P(38+5)
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR  Amelogenin:X;CSF1PO:12;D13S317:12,14;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19
同工酶
染色體
使用權限 A類人胚腎細胞;293 [HEK-293]操作步驟
處理方法
1、用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是經(jīng)過滅菌處理的)培養(yǎng)瓶外部。
2、肉眼觀察培養(yǎng)基,若出現(xiàn)渾濁情況,請及時。
3、將細胞置于顯微鏡下觀察,如有污染,請及時。
4、嚴格無菌操作,拆下封口膜,如果細胞的量較少,可放置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞量足夠,可進行離心收集細胞,用1×PBS洗兩遍,加入新鮮培養(yǎng)液后置于37℃,5%CO 2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞密度達到80%以上或存在成團現(xiàn)象,建議用0.25%*消化后傳代培養(yǎng)。
5、如果細胞為凍存狀態(tài),可將其繼續(xù)放入液氮中繼續(xù)保存。也可將其放入37℃的水浴中不時搖動,盡快解凍。解凍后,用75%酒精將凍存管擦拭干凈,用吸管吸出細胞懸液,放入培養(yǎng)瓶中,再加入相應的細胞培養(yǎng)液,放于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
人胚腎細胞;293 [HEK-293]操作步驟
細胞培養(yǎng)知識:
1.應如何避免細胞污染?
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室 環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好之細胞來源和培養(yǎng) 基配制是減低污染之方法。
2.如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?
直接滅菌后丟棄之。
3.購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?
研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性 損傷, 以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
4.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳, 常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質不佳。血清使用 錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于-80℃太久。
5.收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血 鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
Anti-FOSL1    FOSL1抗體 麥康凱瓊脂3號      Maconkey Agar No.3
Anti-FOSL2    FOSL2抗體 堿性瓊脂平板     Alkaline Agar
anti-FoxP1   FoxP1抗體 堿性膽鹽瓊脂     Alkaline Bile Salt Agar
Anti-FoxP3   叉頭蛋白3-T細胞轉錄因子 胰膘肉湯基礎     Tryptose Broth Base
anti-Measles virus of fusion protein   抗麻疹病毒抗體 豆粉瓊脂(血瓊脂基礎)   Blood Agar Base
Anti-FSH    鼠抗人促卵泡生成素單克隆抗體 細菌L型增菌液 
anti-FSH-R   促卵泡刺激素受體抗體 細菌L型分離瓊脂 
Anti-G Protein   G蛋白/鳥苷酸結合蛋白抗體 溶血瓊脂基礎 
Anti-GABA-ARα1   γ1氨基丁酸受體α1抗體 龍膽紫血液瓊脂基礎 
anti-GABAB1   抗g-氨基丁酸B1受體抗體 改良羅氏培養(yǎng)基基礎     L-G medium Base,modified
anti-GABAB2   抗g-氨基丁酸B2受體抗體 酸性L-G培養(yǎng)基基礎 Acid L-G medium Base
Anti-GAD-65    *脫羧酶-65抗體 堿性L-G培養(yǎng)基基礎 Alkaline L-G medium Base
Anti-GAD-67    *脫羧酶-67抗體 TCH(噻吩-2-羧酸酰肼) 
Anti-Galanin   神經(jīng)節(jié)肽抗體“甘丙肽” 戊烷脒*瓊脂基礎 
Anti-Galectin-3   半乳糖凝集素-3抗體 *瓊脂基礎 
Anti-GAP-43    神經(jīng)生長相關蛋白-43 指示選擇性培養(yǎng)基基礎 
Anti-GAPDH    3-磷酸甘油醛脫氫酶 PLET 瓊脂基礎 PLET Agar Base
Anti-GASR   G蛋白偶聯(lián)受體-2抗體 戊烷脒 
Anti-Gastrin   胃泌素/蛙皮素抗體 炭疽桿菌疫苗 
Anti-Gax   生長終止特異性同源盒基因抗體 炭疽桿菌沉淀血清 
Anti-GCS    *半*γ合成酶抗體 炭疽桿菌噬菌體 
anti-G-CSF   粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子抗體 炭疽桿菌診斷抗原 
anti-GDF-8   肌細胞生長抑制素抗體 *敏感紙片 
Anti-GDNF    膠質細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 印度墨汁 
Anti-Gelsolin   凝溶膠蛋白抗體 碘伏(液體) 
Anti-GFAP   膠質纖維酸性蛋白抗體 * 
Anti-GFP    綠色熒光蛋白 美藍(亞甲基藍) 
Anti-GFRA4   GDNF家族受體α-4抗體 水楊素 
Anti-GFRα-1/GDNF   GDNF家族受體α-1抗體 MiddleBrook 7H10 瓊脂 MiddleBrook 7H10 Agar
Anti-GHR    生長激素受體抗體 MiddleBrook 7H11 瓊脂 MiddleBrook 7H11 Agar
Anti-Ghrelin   腦腸肽抗體 氣單胞菌鑒別瓊脂  Aeromonas Differential Agar
Anti-GHRF/GHRH   生長激素釋放激素因抗體 *肉湯 Arginine Broth acc. To Schubert
Anti-GIP    胃泌素抑制肽抗體 曲霉素瓊脂基礎(AFPA) 
Anti-GITR    糖皮質激素誘導腫瘤壞死因子受體抗體 假單胞分離瓊脂 Pseudomonas Isolation Agar
Anti-Glasses Snake poison Protein   抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 假單胞分離肉湯 Pseudomonas Isolation Broth
Anti-GLI1   下游轉錄因子Gli1蛋白抗體 肌醇測定培養(yǎng)基 Inositol Assay Broth
Anti-GLP-1   胰高血糖素樣肽-1抗體 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 Bromcresol Purple Dextrose Broth
Anti-GLP-2   胰高血糖素樣肽-2抗體 酸性肉湯 Acid Broth
Anti-GLUT1   葡萄糖轉運蛋白1抗體 *測定培養(yǎng)基 Vitamin PP Assay Broth
 

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