C肽放免試劑盒試驗(yàn)原理、方法   

C-P 免放藥盒是一種固相“三明治”夾心式免疫放射量度分析，由兩株單克隆 抗體識別和分析。兩株單克隆抗體分別抗 C-P 分子相距很遠(yuǎn)的兩個(gè)位點(diǎn)：株單 抗包被于試管底部內(nèi)壁；第二株單抗用 125I 進(jìn)行放射性標(biāo)記，用作示蹤劑。存在于 標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品中的 C-P 分子被夾在兩株單抗之間。過量未結(jié)合的示蹤劑在洗滌 過程中容易地被除去，而抗體僅保留了被吸附的抗體-抗原-示蹤劑結(jié)合物。結(jié)合在 包被管上的放射活性的量與測定開始時(shí)存在的 C-P 的量成比例。

由于 C-P 極不穩(wěn)定，溶解后需立即使用，其余溶液按每次使用量分裝后置-20℃可 儲存 3 個(gè)月，只能凍融一次，避免反復(fù)凍溶。

【適用儀器】 1、γ－計(jì)數(shù)器 2、振蕩器

【樣本要求】 110 微升人血清樣本。 采靜脈血 5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉(zhuǎn)／分離心，取其上清液， 放置玻璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-25℃~-18℃儲存 6 個(gè)月。

【試驗(yàn)方法】

1、 將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少 30 分鐘以上才可進(jìn)行操作； 標(biāo)準(zhǔn)品用 1.0ml 去離子水溶解后輕輕搖勻，放置 10min 左右方可使用。

2、 打開包被試管包，取出包被管進(jìn)行編號，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)；

3、 取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本 100µl 加入相應(yīng)編號的試管中；

4、 每管均各加入 100µl 標(biāo)記抗體液，室溫（17-27℃）振蕩 1 小時(shí)后，吸干 或倒出；

5、 每管均各加入 2ml 洗滌液后，吸干或倒出，再重復(fù)操作一遍此步驟；

6、 用 γ-計(jì)數(shù)器測定每管 1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)；

7、 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。