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(1)ATCC細(xì)胞生長(zhǎng),我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng),我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。
(2)過(guò)濾,如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物,血清將很難過(guò)濾。一般說(shuō)來(lái),因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時(shí)zui后已經(jīng)經(jīng)過(guò)100nm或者40nm的過(guò)濾處理,并且經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè),因此不*再過(guò)濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒(méi)有必要再過(guò)濾處理血清,在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。
(3)污染,磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭(zhēng)端。研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀,因此就會(huì)比較警覺(jué)的去做無(wú)菌試驗(yàn),將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天,結(jié)果可能會(huì)觀察到更多的絮狀沉淀,因此就斷定血清被污染了。并且當(dāng)研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時(shí)往往可以看到一些可以運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn),因此就更加確認(rèn)是血清被污染了。于是,ATCC細(xì)胞研究者就會(huì)花費(fèi)更多的時(shí)間和精力來(lái)和生產(chǎn)商確認(rèn),但zui終確定血清沒(méi)有被污染而只是沉淀。為了避免這些問(wèn)題的發(fā)生,我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌,而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。另外,也可以進(jìn)行革蘭氏染色,在油鏡下觀察,以確認(rèn)是否有污染。
首先要注意正確的血清解凍步驟,而且溶解過(guò)程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加,使用中應(yīng)該盡量避免:(1)熱滅活血清;(2)在37℃下培養(yǎng)血清;(3)反復(fù)凍融;(4)γ射線照射;(5)*儲(chǔ)存在2-8℃;(6)ATCC細(xì)胞在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
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