上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司
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產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
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更新時間:2017-07-25 15:42:12瀏覽次數(shù):194次
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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)(CHO/DHFR)是我公司重點(diǎn)推廣產(chǎn)品,我們有專業(yè)的技術(shù)人員全程指導(dǎo),請放心購買,發(fā)貨時均會附上質(zhì)檢報告單、使用說明書和*用法用量,提供正規(guī)發(fā)票。
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)(CHO/DHFR)
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞為二氫*還原酶缺陷細(xì)胞。在沒有HT(次黃嘌呤-胸腺嘧啶)時細(xì)胞會死亡。細(xì)胞培液中加氨甲喋呤可以防止對藥物低抗性的回變細(xì)胞的生長。
細(xì)胞特性
1)來源:中國倉鼠
2)形態(tài):貼壁生長時,呈上皮細(xì)胞樣。
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)(CHO/DHFR)細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1.準(zhǔn)備IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12200036);優(yōu)質(zhì)胎牛血清,15%,雙抗1%;用于表達(dá)蛋白時,也可使用懸浮培養(yǎng)基,使細(xì)胞懸浮生長。
2. 培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細(xì)胞處理:
1.復(fù)蘇細(xì)胞:將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?br />細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2.細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3.細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例;
細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)(CHO/DHFR)注意事項(xiàng):
收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們。
所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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