上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司
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產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
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更新時間:2017-07-25 15:23:27瀏覽次數(shù):149次
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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
---|---|---|---|
適用領(lǐng)域 | 科研 |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)是我公司重點(diǎn)推廣產(chǎn)品,我們有專業(yè)的技術(shù)人員全程指導(dǎo),請放心購買,發(fā)貨時均會附上質(zhì)檢報告單、使用說明書和*用法用量,提供正規(guī)發(fā)票。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)
細(xì)胞介紹
CHO 細(xì)胞以人 CTLA-4 基因細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域序列和人IgCgamma1的絞鏈區(qū),CH2和CH#區(qū)序列的融合結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)染,構(gòu)建了這株細(xì)胞。它們表達(dá)融合蛋白(CTLA4Ig)。
細(xì)胞特性
1)來源:中國倉鼠卵巢
2)形態(tài) :可貼壁生長(上皮細(xì)胞樣),也可懸浮生長(圓球形)
3)含量:>1x10 6個/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25 瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入*使用的培養(yǎng)基后至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一. 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
培養(yǎng)條件:貼壁生長時,選擇DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO31.5g/L, 添加0.2 mM*,0.001mM氨甲蝶呤),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。[MTX是基因DHFR產(chǎn)物的抑制物。當(dāng)培養(yǎng)基中存MTX時,MTX可滲入細(xì)胞內(nèi)與DHFR蛋白結(jié)合,使核苷酸的合成受阻。但是DHFR基因連同其附近幾千KB的DNA還會擴(kuò)增以滿足核苷酸合成的需要。理論上MTX濃度越大,DHFR基因擴(kuò)增越多,與 DHFR基因連鎖的目的蛋白基因也表達(dá)得越多]懸浮培養(yǎng)時,請使用懸浮生長培養(yǎng)基,培養(yǎng)基為:EX-CELLCD-CHOCHOSerum-freeMedium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich,貨號:24361C)添加物:L-*(Sigma-Aldrich,貨號:G8540-25G)Anti-ClumpingAgent(Gibco,貨號:01-0057AE)備注 :CD-CHOCHOSerum-freeMedium請按照培養(yǎng)基配制說明書配制,L-*配制濃度為 200mM,工作濃度為8mM(即稀釋25倍,如500mlCHOSerumfreeMedium中添加20ml200mML-*,抗結(jié)團(tuán)劑使用為1%,即 500mlCHOSerum-freeMedium 中添加5ml抗結(jié)團(tuán)劑)
1)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
2)凍存液:90%*培養(yǎng)基(貼壁生長凍存時或90%懸浮培養(yǎng)基(懸浮生時),10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞 處理 :
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍
存。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)注意事項:
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們。
2.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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