試劑盒用于測定人血清、血漿、安排及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。注意事項及操作流程如下：
一、ELISA試劑盒操作流程：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚乙 烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗刷，下同)。
2、加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。(一起做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗刷。
4、加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、停止反響：于各反響孔中參加2M硫 酸0.05ml。
6、成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽性程度越強，陰性反響為無色或極淺，根據(jù)所呈色彩的深淺，以“+”、“-”號表明。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。辦法二用于檢測不知道抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗刷3次。
加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷。(一起做空白、陰性及陽性孔對照)
于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui終一遍用DDW洗刷。
二、ELISA試劑盒注意事項：
1、一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理；
2、底物請避光保存；
3、濃洗刷液可能會有結(jié)晶分出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果；
4、請每次測定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于規(guī)范品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時請zui終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）；
5、嚴格按照說明書的操作進行，實驗成果斷定有必要以酶標儀讀數(shù)為準；
6、各步加樣均應(yīng)運用加樣器，并常常校對其準確性，以避免實驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，引薦運用排槍加樣；
7、ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存；
8、封板膜只限一次性運用，以避免穿插污染。
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