兔鈣調(diào)磷酸酶調(diào)節(jié)蛋白1（RCAN-1）ELISA試劑盒操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96 孔配置48 孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
*6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
兔鈣調(diào)磷酸酶調(diào)節(jié)蛋白1（RCAN-1）ELISA試劑盒洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加*40μL；空白孔不
加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 兔鈣調(diào)磷酸酶調(diào)節(jié)蛋白1（RCAN-1）ELISA試劑盒有效期：6 個月
