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技術(shù)文章

白介素elisa試劑盒實驗中問題分析

閱讀:293發(fā)布時間:2017-6-13

1.白介素elisa試劑盒孵育反應(yīng)時間不足
定時鐘準(zhǔn)確定時
2.洗滌時沖擊力太大,洗滌液浸泡時間太長,洗滌次數(shù)增加
減少洗滌沖擊力,按說明書要求保留洗滌時間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
3.顯色劑滴加量不足或順序顛倒,或混合后加入
滴加顯色液時,滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,反加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
4.顯色劑反應(yīng)時間不足
準(zhǔn)確定時
5.蒸餾水水質(zhì)有問題
測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
6.試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高
白介素elisa試劑盒置保溫箱內(nèi)運輸,并放足夠數(shù)量的冰塊,盡量縮短運輸時間
7.試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。
8.樣品和NaN 3 防腐,抑制了酶的反應(yīng)
樣品不能加 NaN 3 防腐
9.試劑盒超過有效期
超過效期試劑盒不要使用
10.試劑開啟時間過長長菌
試劑開啟后請盡量在短時間內(nèi)用完
11.移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔
 校正移液器,吸頭要配套,每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快,排放應(yīng)*。吸頭內(nèi)壁要清潔,一次性使用。
12.恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃)放入反應(yīng)板時注意培養(yǎng)箱溫度,及時調(diào)整,孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多,影響溫度平衡。
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
不同批次的白介素elisa試劑盒在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。


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