英文名稱  Anti-phospho-ECT2 (Ser370)

中文名稱  磷酸化上皮細胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體

別    名  ECT2 (phospho S370); ECT2 (phospho Ser370); p-ECT2 (Ser370); ECT 2; ECT2; ECT-2; ECT2 protein; Epithelial cell transforming sequence 2; Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene; Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene protein; FLJ10461; MGC138291; Protein ECT2; ECT2_HUMAN; Epithelial cell-transforming sequence 2 oncogene.

濃    度  1mg/1ml    

規(guī) 格  0.1ml/200μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human

產(chǎn)品類型  一抗  磷酸化抗體

研究領(lǐng)域

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human ECT2 around the phosphorylation site of Ser370

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

抗體的熒光標(biāo)記法：

（一）基本原理

賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯(lián)抗體；

2.碳酸氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

AQP9    水通道蛋白-9抗體

Annexin A3    膜粘連蛋白A3抗體

Annexin IV    膜粘連蛋白 A4抗體

APG8A    自噬相關(guān)蛋白8A抗體

phospho-Akt (Thr450)    磷酸化蛋白激酶B抗體

phospho-AMPK alpha-1 (Thr198)    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-Akt(Thr308)    磷酸化蛋白激酶B抗體

APOBEC3G    脫氧胞苷脫氨酶蛋白抗體

AKAP13    蛋白激酶錨定蛋白13抗體

AP1M2    AP-1μ2抗體

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1

大鼠纖維母細胞；1/EJ 1-1

黃胸鼠肺成纖維細胞；YCR

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞；PC-12 [PC12]

黑化大家鼠肺成纖維細胞；NRm

大鼠肺細胞；WTRL1

倉鼠源細胞

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞；CHO/dhFr-

中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆)；CHO-K1

敘利亞倉鼠腎細胞；BHK-21

中國倉鼠卵巢細胞；CHO

人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細胞株；7WCY1.0

人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株；7WD10

人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株；7WML6.0

人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株；7WPS1

Anti-phospho-ECT2 (Ser370)抗體中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆)；CHO-K1

敘利亞倉鼠腎細胞；BHK-21

中國倉鼠卵巢細胞－二氫葉酸還原酶缺陷型；CHO/dhFr-

敘利亞倉鼠腎細胞；BHK-21

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。