細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

公司向您推薦PrimaCell™人臍靜脈內(nèi)皮細胞試劑盒說明書的詳細說明：

細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

組織乙酰膽堿酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 Caspase-4 p20（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100微克

線粒體呼吸鏈復合物II（琥珀酸－輔酶Q還原酶）活性定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用型HCV（HEPATITIS VIRUS C）病毒定性檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞培養(yǎng)污染性支原體M.hyorhinis鑒定16S rDNA PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

動物全血高質純化線粒體分離試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

pYES＋目的基因 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：釀酒酵母表達

透射電鏡（TEM）環(huán)氧樹脂組織包埋試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

鈣離子膜通道鈉鈣交換體（NCX/線粒體）功能熒光檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

植物磷脂酶D2（Phospholipase D2）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血牛病毒性腹瀉病毒II型（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）定性基因檢測試劑盒   進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

真菌/酵母細胞線粒體DNA萃取試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

PrimaCell™人臍靜脈內(nèi)皮細胞試劑盒說明書紫花前胡苷 供鑒別用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

廣藿香酮 鑒別 進口/國產(chǎn) 2-8℃，避光 規(guī)格: 20mg

喬松素 供含量測定用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

榿木酮 含量測定 進口/國產(chǎn) 2-8℃，密封 規(guī)格: 20mg

酸漿苦味素L 供鑒別用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

苷松新酮 供鑒別用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

6-姜辣素 供含量測定用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 0.2ml

1-基海因 供鑒別 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

安五脂素 供鑒別用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

23-酰澤瀉醇B 含量測定 進口/國產(chǎn) -20℃，避光 規(guī)格: 20mg

3,6-二芥子?；崽?供含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg

遠志口山酮 供含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 20mg