實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
氯代二苯基膦 97% 2-氯-4-基苯腈(3S)-3-(叔氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2S)-醇Human SERPINA6(Corticosteroid-binding globulin) ELISA Kit

Human UBR4(E3 ubiquitin-protein ligase UBR4) ELISA Kit

(3-羧基)三苯基溴化膦 98.0% 3-氯-4-基苯腈水溶性維生素EHuman CRYAB(Alpha-crystallin B chain) ELISA Kit

Human GLB1(Beta-galactosidase) ELISA Kit

1,3-二基巴比妥酸 99% 4-溴-2-氟苯磺酰胺矢車菊素-3-O-葡萄糖苷Human TALDO1(Transaldolase) ELISA Kit

Human INSL3(Insulin-like 3) ELISA Kit

二苯基次膦酰氯 98% 3-氰基-4-氟苯硼酸薄荷精油Human TPSD1(Tryptase delta) ELISA Kit

Human HPR(Haptoglobin-related protein) ELISA Kit

二硫化二苯并噻唑 98% 3-氨基-2-基酸水合物黃芪總皂苷Human GUSβ(Beta-glucuronidase) ELISA Kit

Human HSPA4(Heat shock 70 kDa protein 4) ELISA Kit

二苯基膦 95% 2-氨基-3-氰基-4,5-二基吡咯毛蕊異黃酮苷Human IDS(Iduronate 2-sulfatase) ELISA Kit

Human GALNS(N-acetylgalactosamine-6-sulfatase) ELISA Kit

基三苯基氯化膦 98% 氯酞酸谷氨酸鉀Human VGF(Neurosecretory protein VGF) ELISA Kit

Human GPT(Alanine aminotransferase 1) ELISA Kit

基三苯基化膦 95% 2-(十八氧基)醇韋蘭膠Human FBLN5(Fibulin-5) ELISA Kit

Human MUC21(Mucin-21) ELISA Kit

基三苯基溴化膦  98% 2-氨基-3-氰基-4,5-二基吡咯一水葡萄糖Human NR1H2(Oxysterols receptor LXR-beta) ELISA Kit

Human CAV1(Caveolin-1) ELISA Kit

2-巰基苯并噻唑 98% 氯酞酸甜橙果粉Human LIPF(Gastric triacylglycerol lipase) ELISA Kit

Human CYP3A4(Cytochrome P450 3A4) ELISA Kit
斑蝥PCR鑒定試劑盒說明書17-KS ELISA Kit  大鼠17-酮類固醇4-溴-2,6-二氟苯酸 98%二氯(2-吡啶酸)金 98%Mannheimia spp.

16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1)ELISA Kit  Hpt/HP小鼠16α羥基雌酮1(R)-(+)-2-溴-alpha-基苯醇 98%二氯[(±)-BINAP]二金(I) 97%Mannheimia varigena

16- Alpha OHE-1(Human 16- AlphaHydroxyestrogen 1) ELISA Kit  人16α羥基雌酮13-溴喹啉 98%基二苯基膦 98%Marek's Disease Virus(MDV)1

15-LO/LOX(Mouse 15-lipoxygenase) ELISA Kit  小鼠15脂加氧酶1-Boc-3-氧 98%氯化金(III) 水合物 Au ≥48%Marek's Disease Virus(MDV)2

15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit  人15脂加氧酶N-Boc-異六煙堿酸 99%氯化亞金(I) 99.9%Marek's Disease Virus(MDV)3

15-LO/LOX ELISA Kit  大鼠15脂加氧酶科里內(nèi)酯 98%溴化金 99%Marek's Disease Virus(MDV)

12-HETE(Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid) ELISA Kit  人12羥二十烷四烯酸5-氯-1,3,3-三基-2-亞基吲哚啉 90%四(三苯基膦)化銠(I) Rh 8.9% minMarteilia refringens

1,5-AG(Human 1,5-anhydroglucitol) ELISA Kit  人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨1-(2-氯基-5-磺酸苯基)-3-基-5-吡唑酮（25CSMP）  97%(R,R)-2,2'-異亞基雙(4-苯基-2-惡唑啉) 97%Marteilia spp.

1,3-DPG(Human 1,3-Disphosphoglycerate, ELISA Kit  人1,3-二磷酸甘油酸鹽酸西替利嗪 98%(S,S)-2,2'-異亞基雙(4-苯基-2-惡唑啉) 97%Marteilia sydneyi

1,3- BetaD-Glu(Human 1,3- BetaD glucosidase) ELISA Kit  人1,3-βD葡葡糖苷酶5-氯氧化吲哚 98%(S,S)-(-)-2,2'-異亞基雙(4-叔基-2-惡唑啉) 99%Mecistocirrus digitatus