培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

10X通用型非變性裂解 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：適合各種細胞native蛋白

細胞乙醇脫氫酶III（S-亞谷胱苷肽還原酶）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細胞IGF 蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

 茶水氟元素比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織基質(zhì)金屬蛋白酶 125I同位素標記檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

載玻片細胞EGFR 蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

通用型總淀粉化學比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

免疫印跡超敏型HRP－TMB底物顯色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

蜂蜜木糖醇比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

載玻片細胞PASE-3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

寡核苷酸探針非同位素AP－BCIP/NBT法DNA南方雜交*試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

Primarker™人支氣管平滑肌細胞鑒定試劑盒3-氟-2-甲吡分子式：111.1英文名稱：3- -2- methyl pyridine號：15931-15-4分子量： C6H6FN

1-甲酰咪唑分子式：96.09英文名稱：1- a號：3197-61-3分子量： C4H4N2O

聚砜分子式：1327.58英文名稱：Polysulfone號：25135-51-7分子量： C81H66O12S3X2

*鋁分子式：72.09英文名稱：Three methyl aluminium號：75-24-1分子量： C3H9Al

5-喹啉分子式：145.16英文名稱：5-, the alcohol號：578-67-6分子量： C9H7NO

環(huán)戊英文名稱：Loop e分子式：68.12分子量： C5H8號：142-29-0

甲環(huán)戊英文名稱：Methyl group分子式：82.14分子量： C6H10號：693-89-0

L-丙氨叔丁酯英文名稱：L- alanine tert butyl ester hydrochloride分子式：181.66分子量： C7H15NO2·HCl號：13404-22-3

番瀉苷D英文名稱：The D分子式：848.77分子量：C42H40O19號：37271-17-3

酒石酸氫鉀分子式：188.18英文名稱：Potassium hydrogen號：868-14-4分子量： C4H5KO6

2,3-雙(4-硝)-5-四氮唑氯水合物分子式：424.8英文名稱：2,3- - (4- nitrophenyl) -5- phenyl tetrazole chloride hydrate號：69231-13-6分子量： C19H13ClN6O4·xH2O