實(shí)驗(yàn)操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周?chē)陌ぃ瑢⑴咛シ庞跓o(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦Primarker™人臍靜脈平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒規(guī)格的詳細(xì)說(shuō)明：

細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴(lài)性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋?xiě)腋〖?xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

 冰凍切片組織TRAIL 蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

細(xì)胞乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

冰凍切片組織COLLAGEN II蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

真菌格莫瑞六亞甲基四胺（Gomori's Methenamine Silver；GMS）銀染試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

  組蛋白西方雜交分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：5次

細(xì)胞HPV6（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6）病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

冰凍切片免疫熒光顯微鏡基礎(chǔ)檢測(cè)試劑盒（無(wú)一抗和二抗） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

非吸煙者人體肺組織S9組分（5毫克/毫升） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：500微升

胞漿超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

飲料果膠化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度高效相色譜定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

石蠟切片組織VEGF蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

Primarker™人臍靜脈平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒規(guī)格性紫17英文名稱(chēng)：Acid violet 17分子式：761.92分子量： C41H44N3NaO6S2號(hào)：4129-84-4

雷公藤內(nèi)酯甲英文名稱(chēng)：, a分子式：454.68分子量：C30H46O3號(hào)：84104-71-2

4-氯-6-(鄰氧)嘧分子式：英文名稱(chēng)：4- chloro -6- (ortho cyanophenoxy) pyrimidine號(hào)：分子量：

2-甲氧-3-三氟甲吡分子式：177.12英文名稱(chēng)：2-, -3- three號(hào)：121643-44-5分子量： C7H6F3NO

雙乙酰克利西丁磺英文名稱(chēng)：Diacetyl Clifford Xiding sulfonic acid分子式：323.3分子量： C12H14NNaO6S號(hào)：133167-77-8

2--4'-甲聯(lián)分子式：193.24英文名稱(chēng)：2- -4'- - methylbiphenyl號(hào)：114772-53-1分子量： C14H11N

4-(4-二甲氨乙)-1-吡分子式：394.29英文名稱(chēng)：4- (4- two carbamoylated styryl) -1- methyl pyridine iodide號(hào)：105802-46-8分子量： C18H23IN2

2-溴-6-甲吡分子式：172.02英文名稱(chēng)：2- -6- methyl pyridine號(hào)：5315-25-3分子量： C6H6BrN

4-(2,4-二氟)分子式：197.22英文名稱(chēng)：4- (two 2,4- difluorophenyl) piperidine號(hào)：291289-50-4分子量： C11H13F2N

N,N'-雙[2-均*酰)-3-氧代丁]-(1S,2S)-1,2-二乙二胺合鈷分子式：697.74英文名稱(chēng)：N, N'- dual [2- three methyl benzoyl) -3- oxo butylidene - (1S, 2S) -1,2- two phenyl ethylenediaminecobalt號(hào)：171200-71-8分子量： C42H42CoN2O4

2,3,5-三氯-4-吡甲醛分子式：210.45英文名稱(chēng)：2,3,5- three -4- pyridine formaldehyde號(hào)：251997-31-6分子量： C6H2Cl3NO

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。