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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
Primarker™人主動脈平滑肌細胞鑒定試劑盒規(guī)格 | 6次/盒 | YS-X6893 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
大丁草(gerbera)增殖培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶/片劑
真菌/酵母纖維素酶(cellulase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
載玻片細胞P16蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
胡蘿卜(carrot)*培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶/片劑
冰凍切片過氧化酶活性(pH7.2超敏型)染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
細胞P38蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/50 次
Linsmaier & Skoog*培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶/片劑
細胞EPHB4激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片組織CDK4蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
組織傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhi)定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
全組織a-淀粉酶染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
細菌脂肪酶(LIPASE)活性定性染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
Primarker™人主動脈平滑肌細胞鑒定試劑盒規(guī)格2-乙萘分子式:152.2英文名稱:2- ethyl naphthalene號:2949-26-0分子量: C12H8
氯聯(lián)分子式:316.57英文名稱:Chlorine iodine號:1483-72-3分子量: C12H10ClI
甲鈣黃綠素藍水合物[用于配位滴定銅時的指示劑]英文名稱:Methyl calcein blue [indicator for complexometry分子式:277.28分子量: C14H15NO5·xH2O號:81028-96-8
2-硫甲并咪唑分子式:164.23英文名稱:2- thiol methyl benzimidazole號:53988-10-6分子量: C8H8N2S
2,2,2-三氟乙分子式:114.07英文名稱:2,2,2- three f號:5042-30-8分子量: C2H5F3N2
分散紅11英文名稱:Disperse red 11分子式:268.27分子量: C15H12N2O3號:2872-48-2
2,6-二-3-氟-4-(三氟甲)吡分子式:英文名稱:2,6- two amino -3- -4- (three f) pyridine號:737000-87-2分子量: C6H5F4N3
琥酯英文名稱:Artesunate分子式:384.42082分子量:C19H28O8號:88495-63-0
溴甲酚綠英文名稱:Bromocresol green分子式:698.01分子量: C21H14Br4O5S號:76-60-8
性鉻藍K英文名稱:Acid chrome blue K分子式:586.41分子量: C16H9N2Na3O12S3號:3270-25-5
酮麝香英文名稱:Ketone musk分子式:238.41分子量:C16H30O號:541-91-3
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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